1、我們實驗室在前期研究中,以苯并噻二唑(BTH)誘導水稻抗病性,用抑制性差減雜交法分離鑒定了200多個差異表達的cDNA.基因數(shù)據(jù)庫同源性搜索分析表明,其中差別表達克隆HIBI-n9和BIHI-w2與已知植物蛋白磷酸酶2C(PP2C)基因具有較高的同源性,推測這兩個克隆很可能編碼水稻PP2C基因的部分序列.為明確這兩個可能的水稻磷酸酶基因的生物學功能以及在水稻抗病性中的作用,該研究通過5'RACE和3'RACE,結(jié)合電子克隆的方法,分離到

2、這兩個水稻磷酸酶基因的全長cDNA序列,分別命名為OsBIPP2C1和OsBIPP2C2.采用電子克隆的方法,首先在EST數(shù)據(jù)庫搜索與BIHI-w2相匹配的水稻EST,并拼接成一條長的序列.用0.3 mmol/L BTH懸浮液噴霧處理水稻后6 h后OsBIPP2C1即受到快速激發(fā),相對較高的水平維持至24 h,至72 h才逐漸降低到處理前的水平.將OsBIPP2C1基因連接到轉(zhuǎn)基因載體CHF3的CaMV-35S啟動子下游,轉(zhuǎn)化煙草,得到

3、13株轉(zhuǎn)基因株系.PCR擴增檢測OsBIPP2C1基因都整合到煙草基因組中,Northem雜交能檢測到大部分株系OsBIPP2C1的表達,并組成型表達煙草PR1基因.轉(zhuǎn)OsBIPP2C1基因T1代增強了煙草對TMV和煙草黑脛病(Phytophthoraparasitica var.nicotianae)的抗性.用類似的方法克隆到另外一個PP2C蛋白基因OsBIPP2C2,即水稻受BTH誘導的蛋白磷酸酶2C 2(Oryza sativa