1、蒙古沙冬青(Ammopiptanthus mongolicus)是內(nèi)蒙古等西北荒漠區(qū)特有的強(qiáng)抗逆闊葉灌木。用RNA-Seq技術(shù)分析表明，其DREB類轉(zhuǎn)錄因子AmDREB2C和葉綠體ATP合酶δ亞基基因AmAtpD在低溫和干旱脅迫下表達(dá)量顯著上調(diào)。為了研究其在抗逆性中的功能和作用機(jī)理，我們對這兩個基因進(jìn)行了克隆和表達(dá)分析，并對AmDREB2C進(jìn)行了轉(zhuǎn)基因功能驗(yàn)證，得到如下主要研究結(jié)果:
　　(1)采用PCR方法擴(kuò)增到AmDREB2C

2、編碼區(qū)cDNA與gDNA，經(jīng)測序發(fā)現(xiàn)均由1191bp組成，因此無內(nèi)含子序列;推測其編碼蛋白由396個氨基酸殘基組成，分子量為43.80 kDa，等電點(diǎn)為4.72，含1個AP2結(jié)構(gòu)域和1個核定位信號，定位于細(xì)胞核。
　　(2) AmDREB2C的表達(dá)受低溫和干旱脅迫的顯著誘導(dǎo)，尤其在低溫脅迫下其誘導(dǎo)表達(dá)較為持久且強(qiáng)烈。
　　(3)將AmDREB2C編碼區(qū)cDNA片段分別構(gòu)建超表達(dá)載體和誘導(dǎo)表達(dá)載體，并利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化擬南芥

3、。通過對轉(zhuǎn)基因株系進(jìn)行表型鑒定，發(fā)現(xiàn)AmDREB2C在耐低溫、高溫和干旱脅迫中起顯著正調(diào)節(jié)作用，并且轉(zhuǎn)基因株系對外源ABA敏感性增強(qiáng)，對耐鹽性無明顯作用。此外，超表達(dá)該基因無生長延滯現(xiàn)象，并且與誘導(dǎo)表達(dá)在提高抗逆性上無明顯差別。
　　(4)采用PCR方法擴(kuò)增到AmAtpD的編碼區(qū)cDNA和gDNA，經(jīng)測序發(fā)現(xiàn)均由720 bp組成，表明該基因無內(nèi)含子序列;預(yù)測其編碼蛋白含239個氨基酸殘基，分子量為27.00 kDa，等電點(diǎn)為9.6