1、目的：本研究通過構(gòu)建雌激素（estrogen，E2）誘導(dǎo)人乳腺上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化模型，模擬乳腺癌發(fā)生的細(xì)胞學(xué)變化過程并對該模型進(jìn)行成瘤性分析；旨在探討黃芩素（baicalein，Bai）對乳腺上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化過程的化學(xué)預(yù)防作用。同時(shí)，通過考察黃芩素對雌激素激活ERα（estrogen receptorα，ERα）/GPR30（G protein-coupled estrogen receptor，GPR30）信號(hào)通路的影響，進(jìn)一步探討黃芩素干預(yù)乳

2、腺上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化過程的可能機(jī)制。
　　方法:使用Con（0.1%DMSO）、E2（20 nmol/L）、E2（20 nmol/L）+Bai（2μmol/L）、E2（20 nmol/L）+Bai（4μmol/L）、E2（20 nmol/L）+Bai（8μmol/L）持續(xù)作用于MCF-12A和MCF-10A人乳腺上皮細(xì)胞5～10周構(gòu)建細(xì)胞模型；利用臺(tái)盼藍(lán)拒染法、劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell體外侵襲實(shí)驗(yàn)、三維培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)分別分析模型細(xì)胞生長、

3、遷移、侵襲、分化能力的變化；應(yīng)用軟瓊脂糖克隆形成實(shí)驗(yàn)、NOD/SCID小鼠乳腺皮下脂肪墊成瘤實(shí)驗(yàn)評價(jià)模型細(xì)胞體內(nèi)外成瘤能力的變化。此外，應(yīng)用分子對接分析黃芩素與ERα、GPR30的結(jié)合能力。通過western blotting、免疫熒光、EMSA分別考察黃芩素對雌激素誘導(dǎo)ERα的核漿分布、核位移及轉(zhuǎn)錄復(fù)合物形成的影響；同時(shí)，應(yīng)用qRT-PCR觀察黃芩素對雌激素誘導(dǎo)ERα靶基因轉(zhuǎn)錄活化的調(diào)節(jié)作用。采用western blotting分析黃

4、芩素對GPR30下游信號(hào)通路相關(guān)蛋白的作用；利用qRT-PCR研究黃芩素對雌激素誘導(dǎo)GPR30靶基因表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：（1）黃芩素能夠顯著抑制雌激素誘導(dǎo)MCF-12A和MCF-10A細(xì)胞生長、遷移、侵襲能力的增強(qiáng)。（2）黃芩素對雌激素誘導(dǎo)的MCF-12A和MCF-10A細(xì)胞腺泡形成紊亂具有抑制作用。（3）黃芩素能夠降低雌激素誘導(dǎo)MCF-12A和MCF-10A轉(zhuǎn)化細(xì)胞在體內(nèi)外的成瘤能力。（4）分子對接模擬表明黃芩素與雌激素類似

5、分別和ERα、GPR30受體的配體結(jié)合域具有一定的結(jié)合能力。（5）黃芩素共同作用24 h后，雌激素促進(jìn)MCF-12A細(xì)胞ERα的核易位被顯著抑制。同時(shí)，黃芩素抑制ERα的轉(zhuǎn)錄活化并下調(diào)該受體靶基因pS2和Cyclin D1的表達(dá)。（6）黃芩素共作用1 h，可下調(diào)雌激素誘導(dǎo)MCF-10A細(xì)胞GPR30下游靶基因c-FOS、CTGF、CYR61、EGR1的表達(dá)；同樣，黃芩素也能夠抑制雌激素上調(diào)MCF-12A細(xì)胞靶基因c-FOS和CYR61的