1、背景槲皮素(Quercetin；3，3’，4’，5’，5，7-Pentahydroxyflavone，QUE)是一種黃酮類化合物，廣泛分布于自然界各種植物的花、葉、果實之中，具有抗腫瘤、抗氧化清除自由基等多種生物活性。QUE能抑制多種惡性腫瘤細胞的增殖，其中包括HL-60、NB4、MOLT-4、L1210等白血病細胞系。誘導腫瘤細胞發(fā)生凋亡是QUE抑制惡性腫瘤細胞增殖的作用機制之一，QUE還能逆轉腫瘤細胞的多藥耐藥，與其他藥物聯(lián)合應用增

2、強抗腫瘤作用。近年來，QUE在抗氧化清除自由基方面的作用也受到越來越多的關注。 廣州醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院兒科血液病研究室的實驗研究證實了QUE的抗腫瘤活性：QUE能抑制U937、K562、Jurkat細胞增殖，并存在劑量-效應關系和時間-效應關系；與柔紅霉素(Daunorubicin，DNR)聯(lián)用對抑制白血病細胞增殖有較強的協(xié)同作用；QUE單用及與DNR聯(lián)用均能誘導U937、K562、Jurkat細胞凋亡，隨著藥物濃度升高凋亡細胞

3、和壞死細胞比例增加，在一定濃度范圍內QUE將細胞特異性地阻滯在S期，出現(xiàn)凋亡峰；兩藥聯(lián)用較單用DNR組，S期細胞的比例明顯減少。研究還通過小鼠動物實驗初步觀察到QUE對DNR所致的心肌損傷有預防保護作用。DNR能引起小鼠血清心肌酶譜顯著升高，血清和心肌中脂質過氧化產(chǎn)物丙二醛(MDA)含量顯著增高，超氧化物歧化酶(SOD)活性降低，引起心臟充血、水腫，心肌顆粒變性，灶性出血、壞死。而QUE保護組心肌酶升高程度明顯降低、血清和心肌組織中MD

4、A含量無明顯增加，SOD活性不降低，心肌無明顯出血灶及顆粒變性。其機理可能與清除氧自由基、抗脂質過氧化損傷有關。QUE與DNR聯(lián)用可以預防DNR可能出現(xiàn)的心臟毒性。研究的結果提示QUE可能成為一種既能與DNR聯(lián)用對白血病細胞產(chǎn)生協(xié)同抑制作用，又能預防DNR心臟毒性的抗白血病藥物。 白血病為血液系統(tǒng)的惡性腫瘤，在小兒惡性腫瘤中占首位，15歲以下小兒白血病的發(fā)病率近十年來有所上升。白血病的主要治療方法為化療，近20年來，由于化療方案

5、的不斷改進及新藥的出現(xiàn)，已取得令人欣慰的化療療效，急性淋巴細胞白血病(ALL)5年無病生存率達70％～80％；急性非淋巴細胞白血病(ANLL)的初治完全緩解率亦可達90％以上，5年無病生存率在50％以上。DNR是經(jīng)濟、高效的第一代蒽環(huán)類抗生素，是小兒急性白血病化療方案中的基本藥物，也是提高ALL完全緩解率和長期生存率的一個重要藥物，大多數(shù)ALL和ANLL化療的誘導緩解、鞏固和強化治療方案均為包含DNR的聯(lián)合化療。但DNR化療存在許多并發(fā)

6、癥，有些甚至嚴重影響了患兒的生存質量，其心臟毒性就是其中之一。DNR的累積劑量達到一定程度會引起心肌損害，從而明顯限制了DNR的臨床應用。DNR誘發(fā)心臟毒性的確切發(fā)病機制目前仍不清楚，普遍認為是DNR產(chǎn)生的氧自由基損傷心肌。 在作者所在的研究室以往研究工作的基礎上，為了進一步研究QUE對DNR的心臟毒性的保護作用，本研究在細胞學水平和動物實驗水平，在體外培養(yǎng)心肌細胞的離體實驗中觀察QUE對DNR誘導心肌細胞損傷的保護作用；在小鼠

7、的活體實驗中，觀察QUE對DNR誘導小鼠心肌細胞損傷的保護作用。以期進一步證實QUE具有預防DNR心臟毒性、保護心肌的作用，進一步為QUE應用于抗白血病治療提供實驗依據(jù)。 研究目的探討槲皮素對柔紅霉素所致小鼠心臟毒性的預防保護作用及其機制。 研究方法1.體外分離培養(yǎng)乳鼠心肌細胞，分為空白對照組、DNR組、QUE干預組(DNR+QUE組)、QUE組，孵育24小時后，顯微鏡下觀察心肌細胞形態(tài)學變化，流式細胞儀檢測心肌細胞凋亡

8、率，檢測培養(yǎng)介質中乳酸脫氫酶(LDH)、SOD、MDA的含量。 2.32只小鼠分3個實驗組，一組為空白對照組，兩組用柔紅霉素15mg/kgip1次，誘導小鼠心肌損傷，其中一組用槲皮素100mg/kg/dig給藥作為干預組，一組作為柔紅霉素陽性對照組。觀察各組小鼠的血清心肌酶譜、心肌和血清中MDA的含量及SOD活性的變化。觀察心臟大體改變，并制備光鏡切片和電鏡切片，觀察心肌形態(tài)學變化和超微結構變化。 研究結果1.DNR能破

9、壞單層心肌細胞網(wǎng)，破壞心肌細胞，形成大量碎片，引起大量心肌細胞凋亡，培養(yǎng)介質中LDH、MDA含量增高，SOD含量下降。而QUE干預組心肌細胞破壞減少，細胞凋亡減少，培養(yǎng)介質中LDH、MDA含量增高不明顯，SOD含量下降不明顯，并有劑量-效應關系。 2.DNR能引起小鼠血清心肌酶譜顯著升高，血清和心肌中MDA含量顯著增高，SOD活性降低，引起心臟充血、水腫，心肌顆粒變性，灶性出血、壞死，心肌細胞腫脹，胞膜不完整，細胞器外漏，肌纖維

10、排列紊亂，部分肌絲、肌節(jié)、閏盤溶解破壞甚至消失，胞核濃縮，線粒體腫脹，線立體嵴溶解、斷裂甚至消失，部分出現(xiàn)空泡樣變。而QUE干預組心肌酶升高程度明顯降低、血清和心肌組織中MDA含量無明顯增加，SOD活性不降低，心肌無明顯出血灶及顆粒變性，QUE干預組心肌細胞胞膜基本完整，肌纖維基本排列整齊，偶見模糊，肌絲、肌節(jié)、閏盤完整，線立體膜及嵴較完整，較少破壞。 結論1.通過體外心肌細胞培養(yǎng)和小鼠動物實驗證實，槲皮素對柔紅霉素所致的心肌損