1、目的：肺癌發(fā)病率在我國(guó)已居男性各種腫瘤的首位，然而其發(fā)病機(jī)制尚不完全明確。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)多個(gè)基因與肺癌有密切的關(guān)系如：ras、myc、p53等。最近幾年，全基因組關(guān)聯(lián)分析(GWAS)發(fā)現(xiàn)許多新的單核苷酸多態(tài)性（SNPs）與肺癌密切相關(guān)，部分SNPs位于基因的內(nèi)含子或基因間區(qū)域，其作用機(jī)制尚不明確。因此，選取了6個(gè)新發(fā)現(xiàn)的與肺癌相關(guān)的SNPs進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析，篩選出與肺癌相關(guān)聯(lián)的SNP位點(diǎn)，進(jìn)而對(duì)與肺癌有關(guān)聯(lián)的SNPs作用機(jī)制進(jìn)行了探討，為更進(jìn)

2、一步了解肺癌的發(fā)生發(fā)展提供理論基礎(chǔ)，尋找分子治療靶點(diǎn)提供理論依據(jù)。
　　方法：本實(shí)驗(yàn)分為兩部分進(jìn)行，第一部分主要研究候選SNPs與肺癌的關(guān)聯(lián)分析，篩選出與肺癌相關(guān)聯(lián)的SNP位點(diǎn)，第二部分則主要研究該SNP位點(diǎn)的作用機(jī)制。第一部分實(shí)驗(yàn)，通過(guò)病例-對(duì)照研究，采用SNaPshot分型技術(shù)，在391例病例組和342例對(duì)照組人群中，對(duì)候選的6個(gè)SNPs進(jìn)行了分型，然后通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn)與肺癌相關(guān)SNP位點(diǎn)的易感基因。第二部分實(shí)驗(yàn)中過(guò)表達(dá)了S

3、NAI1，然后采用Luciferase實(shí)驗(yàn)對(duì)rs2853677位點(diǎn)所在區(qū)域的序列對(duì)TERT基因的調(diào)控功能進(jìn)行了分析。利用電泳遷移率實(shí)驗(yàn)（EMSA）、染色體免疫沉淀（ChIP）實(shí)驗(yàn)證明了SNP位點(diǎn)所在區(qū)域與蛋白質(zhì)的相互作用進(jìn)行了檢測(cè)。最后通過(guò)染色體構(gòu)像捕獲（3C）技術(shù)對(duì)rs2853677位點(diǎn)所在區(qū)域與TERT基因轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)附近區(qū)域的空間構(gòu)象進(jìn)行了分析。
　　結(jié)果：第一部分實(shí)驗(yàn)，通過(guò)對(duì)6個(gè)SNPs位點(diǎn)rs753955、rs28536

4、77、rs2736100、rs4488809、rs2741354、rs12296850基因分型，對(duì)肺癌發(fā)病進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析發(fā)現(xiàn)rs2853677位點(diǎn)、rs2736100位點(diǎn)和rs12296850位點(diǎn)與肺癌（腺癌）的發(fā)生有關(guān)聯(lián)，rs2853677位點(diǎn)上突變的等位基因C和rs2736100位點(diǎn)上突變的等位基因G增加罹患腺癌的風(fēng)險(xiǎn)，而rs12296850位點(diǎn)上突變的等位基因G降低罹患腺癌的風(fēng)險(xiǎn)。上述3個(gè)SNPs位點(diǎn)在中國(guó)人群中得到證實(shí)，其可在中國(guó)

5、人群中用于預(yù)防腫瘤發(fā)生檢測(cè)的標(biāo)志位點(diǎn)。第二部分實(shí)驗(yàn)，選取了rs2853677位點(diǎn)進(jìn)行進(jìn)一步分析。Lucifer報(bào)告基因表明rs2853677位點(diǎn)上下游1kb區(qū)域具有增強(qiáng)TERT啟動(dòng)子活性的功能，且其增強(qiáng)TERT啟動(dòng)子活性的功能受rs2853677位點(diǎn)多態(tài)性影響。EMSA實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)當(dāng)rs2853677位點(diǎn)為等位基因T時(shí)，SNAI1可與該位點(diǎn)附近序列結(jié)合，而該位點(diǎn)為等位基因C時(shí)則不結(jié)合；ChIP實(shí)驗(yàn)則證明在T/T純合的H446細(xì)胞系中 SNA

6、I1可與 rs2853677位點(diǎn)結(jié)合而 C/C純合的 H209細(xì)胞系中SNAI1則不與rs2853677位點(diǎn)結(jié)合，SNAI1與該位點(diǎn)的結(jié)合則可以抑制增強(qiáng)子的活性，從而降低 TERT基因的表達(dá)水平。染色質(zhì)構(gòu)象捕獲（3C）技術(shù)確認(rèn)了rs2853677位點(diǎn)與TERT基因啟動(dòng)子區(qū)存在空間上的相互靠近，更進(jìn)一步驗(yàn)證了該區(qū)域存在TERT基因增強(qiáng)子。
　　結(jié)論：通過(guò)本研究發(fā)現(xiàn)在中國(guó)人群中rs2853677位點(diǎn)與肺癌（腺癌）發(fā)生相關(guān)，該位點(diǎn)上突變