1、DNA磷硫修飾是迄今為止被發(fā)現(xiàn)的第一類發(fā)生在DNA骨架上的生理修飾，其是由dnd基因簇編碼的DndA、DndB、DndC、DndD、DndE蛋白所調(diào)控。根據(jù)生物信息學分析，DndE蛋白可能是一類NCAIR合成酶的同源蛋白或者是一種PAPS硫轉(zhuǎn)移酶的同源蛋白，這種功能推測上的模糊性為進一步開展DNA磷硫修飾的研究帶來了巨大的困難。因此為了解決這一難點，準確闡述DndE蛋白的生理功能，我們選擇DndE蛋白作為研究對象。為了研究DNA磷硫修飾

2、在物種上的保守性和進化性，我們選擇了來源于Streptomyceslividans66的DndE蛋白作為進一步的研究對象。
　　首先，我們摸索了Streptomyces lividans66 DndE蛋白的表達純化條件，嘗試了不同的載體和不同的表達標簽，如pET-44b、pSJ7、pET-28a。最終發(fā)現(xiàn)當利用PSMT3載體進行異源表達與純化的時候，最終可以獲得比較穩(wěn)定的DndEN-flag-livdan蛋白。在獲得穩(wěn)定的DndE

3、蛋白樣品以后，我們對其開展了一系列功能的研究。研究表明Streptomyces lividans66的DndE蛋白存在構(gòu)象不均一，多聚現(xiàn)象等，且這種多聚與DndE蛋白的濃度有關(guān)系。
　　鑒于DndE蛋白多聚的現(xiàn)象，無法使用NMR技術(shù)進行結(jié)構(gòu)的解析，于是我們嘗試用X-ray的方法對DndE蛋白進行結(jié)晶學研究。在得到比較穩(wěn)定的蛋白樣品后，進行了一系列的結(jié)晶篩選和結(jié)晶優(yōu)化，再進行晶體條件初篩的時候得到了一些DndE的晶體，隨即對一些晶型

4、比較好的晶體進行優(yōu)化，可惜的是，由于沒有達到晶體解析的分辨率，最終沒有得到DndE的晶體結(jié)構(gòu)。
　　根據(jù)最近的文獻報道，發(fā)現(xiàn)在Escherichia coli B7A的DndE蛋白可能是一種骨架新穎的DNA結(jié)合蛋白。于是，我們也猜測Streptomyces lividans66的DndE蛋白是不是也有可能是一種DNA結(jié)合蛋白，為了驗證這一點，我們設(shè)計了隨機標記的熒光DNA雙鏈小分子(fluorescence polarizatio