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文檔簡介
1、目的:在SD大鼠自發(fā)性乳腺腫瘤模型建立的基礎上,探討線粒體凋亡通路關鍵因子在SD大鼠自發(fā)性乳腺腫瘤中的表達規(guī)律及相互作用機制。
方法:首先為SD大鼠自發(fā)性乳腺腫瘤的篩查:將130只(♀∶♂=1∶1)Sprague Dawley(SD)大鼠,SPF屏障環(huán)境中飼養(yǎng)60周后剖殺收集大鼠自發(fā)性乳腺腫瘤組織,通過病理學檢查對腫瘤進行定性并分類,分為3組:正常乳腺組織(Ⅰ組),良性乳腺腫瘤組織(Ⅱ組)和惡性乳腺腫瘤組織(Ⅲ組)。然后在乳腺
2、腫瘤模型建立的基礎之上進行檢測線粒體凋亡通路相關因子在SD大鼠自發(fā)性乳腺腫瘤中的表達情況:分別采用SABC免疫組化染色和RT-RCR法檢測Bcl-2、Bid、P53、AIF、Cyt C、Apaf-1、Caspase-3、XIAP的蛋白和mRNA水平的表達情況。
結果:130只大鼠中有14只檢出自發(fā)性乳腺腫瘤,均為雌性,腫瘤發(fā)生率為10.77%,雌性腫瘤發(fā)生率為21.54%;其中7只為乳腺纖維腺瘤,良性腫瘤發(fā)生率為5.38%,雌
3、性良性腫瘤發(fā)生率為10.77%;7只為乳腺癌(其中3例為乳腺腺癌,2例為乳腺乳頭狀癌,2例為浸潤性導管癌),惡性腫瘤發(fā)生率為5.38%,雌性惡性腫瘤發(fā)生率為10.77%。
線粒體凋亡通路上游關鍵因子表達情況:Bcl-2蛋白免疫組化結果顯示其蛋白在三組中表達有顯著差異,Ⅱ組中蛋白表達量顯著高于Ⅰ組(P<0.01),Ⅲ組中表達顯著增高(P<0.05)。Bid蛋白在Ⅰ組中高表達,極顯著高于Ⅱ組和Ⅲ組(P<0.01);同時Bid基因m
4、RNA相對表達量變化趨勢與蛋白表達一致,在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組中表達呈逐步降低的趨勢。P53蛋白在Ⅰ組有表達,Ⅱ組中表達顯著升高(P<0.05),Ⅲ組中表達升高極顯著(P<0.01),P53基因mRNA相對表達含量變化與蛋白表達變化趨勢呈一致性,在正常、良性、惡性組間的表達也是呈逐漸升高的趨勢,有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。
中游關鍵因子表達情況:AIF蛋白在Ⅰ組高表達,其值顯著高于Ⅱ組和惡性腫瘤中的表達量,而Ⅱ組的表達量顯著高于Ⅲ組
5、(P<0.01); AIF基因mRNA相對表達含量在三組中的變化趨勢與蛋白表達呈一致性,在三組間表達呈逐漸降低的趨勢,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。CytC蛋白在Ⅱ組中表達極顯著高于Ⅰ組和Ⅲ組中的表達量(P<0.01),另Ⅰ組中的表達量顯著高于Ⅲ組(P<0.05)。Cyt C基因mRNA的相對表達量在三組中也是呈現(xiàn)升高后降低的趨勢,與蛋白變化一致,差異極顯著(P<0.01)。Apaf-1蛋白在正Ⅰ組中強陽性表達,Ⅱ組中表達量顯著降低
6、;相對Ⅱ組,Ⅲ組中表達顯著升高;但Ⅲ組中表達顯著低于Ⅰ組中的表達(p<0.01)。Apaf-1基因mRNA相對表達量變化在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組中呈逐漸降低趨勢,與蛋白表達變化趨勢有所不同,可能為轉錄、翻譯的不同步有相關性。
線粒體凋亡通路下游關鍵因子表達:Caspase-3蛋白在Ⅰ組中表達量顯著高于Ⅱ組和惡性腫瘤中的表達量,而Ⅱ組的表達量極顯著高于Ⅲ組(P<0.01); Caspase-3基因mRNA相對表達含量在三組中的變化趨勢與蛋
7、白表達呈一致性,在三組間表達呈逐漸降低的趨勢,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。XIAP蛋白在Ⅰ組中有表達,Ⅱ組中表達顯著升高(P<0.01),Ⅲ組中表達升高極顯著(P<0.01),XIAP基因mRNA相對表達含量變化與蛋白表達變化趨勢呈一致性,在正常、良性、惡性組間的表達也是呈逐漸升高的趨勢,差異極顯著(P<0.01)。
由以上結果可見線粒體凋亡通路上中下游關鍵因子的蛋白及mRNA在三組中的差異均有顯著統(tǒng)計學差異,表明線粒體
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