1、背景：食管癌（Esophageal Cancer, EC）是世界八大常見惡性腫瘤之一，預后很差，2008年全球共有407000人死于EC，其中一半以上在中國。在全球范圍內(nèi)，大多數(shù)EC組織學上屬食管鱗狀細胞癌（Esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）。ESCC在全球不同的地理位置發(fā)病率也大不相同。眾所周知的高風險地區(qū)從土耳其東部一直延伸至中國北部及西部地區(qū)，即所謂的“亞洲食管癌地帶”，其他的主要高發(fā)

2、地區(qū)包括香港、日本、非洲東南部、法國南部和南美的部分地區(qū)。在中國，EC是五大常見惡性腫瘤之一，也是第四大致死癌癥。2008年中國EC發(fā)病率為16.7/100000，共有259235例新增病例和211084例死亡病例。EC的重要特征之一是高死亡率，其五年生存率僅為15％-25%，大多數(shù)病人在臨床上確診之后的生存時間不超過一年。EC預后不良的主要原因是大多數(shù)早期食管癌由于沒有明顯癥狀而不易被發(fā)現(xiàn)，直到中晚期擴散才有臨床癥狀，然而此時已失去了

3、最佳手術(shù)時期。因此，早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷及早期治療是降低EC發(fā)病率及死亡率的有效手段之一。蛋白質(zhì)糖基化修飾是最為常見的一種翻譯后修飾，人體內(nèi)約有70％的蛋白發(fā)生了糖基化修飾。糖蛋白的寡糖側(cè)鏈在細胞與細胞間、細胞與基質(zhì)間相互作用及識別等生物學過程中具有重要的調(diào)控作用，導致許多疾病的發(fā)生發(fā)展過程均涉及了蛋白的異常糖基化。我們前期應用二維電泳及質(zhì)譜技術(shù)已鑒定出22種高甘露糖型和23種唾液酸型差異表達的N-連接糖蛋白，本實驗進一步驗證了其中的7種

4、蛋白質(zhì)分子在ESCC組織及血清中的表達規(guī)律及臨床意義。
　　目的：應用Western blot技術(shù)驗證前期鑒定的7種蛋白在ESCC不同臨床分期組織及血清中的表達規(guī)律，探討這些蛋白質(zhì)分子診斷ESCC的臨床應用價值及前景，為鑒定ESCC特異敏感的生物標志物提供實驗依據(jù)；此外，分析這些蛋白的表達異常與 ESCC發(fā)生、發(fā)展及演進過程的關(guān)系，更深入地理解ESCC發(fā)生發(fā)展的分子機制。
　　方法：⑴ESCC及癌旁組織：選取標本庫中年齡、性

5、別匹配的TNM I-IV期（各期20例）ESCC及其癌旁組織標本，用IP裂解液裂解提取組織蛋白，Bradford法測組織蛋白濃度；⑵血清標本：選取ESCC血清72例、食管炎血清48例和上消化道不適但食管黏膜組織學正常血清24例。血清N-連接糖蛋白富集采用三種混合植物凝集素包括刀豆蛋白凝集素（Concanavalin A, ConA）、晶狀體凝集素（Lentil lectin, LCH）及雪花凝集素（Snowdrop lectin, GN

6、A）組成的親和層析柱富集純化；⑶Western blot：應用12%分離膠、4％濃縮膠電泳分離蛋白、轉(zhuǎn)膜、牛奶封閉，孵育一抗、二抗，ECL顯色曝光；⑷半定量分析：采用Image Master軟件對Western blot條帶進行掃描和灰度分析；⑸統(tǒng)計學分析：采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件處理，Western blot灰度分析結(jié)果采用t檢驗，P<0.05具有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)果：①驗證了7種候選糖蛋白標志物在 ESCC中的差異表達。

7、觸珠蛋白（Haptoglobin, HP）在ESCC的Ⅰ-Ⅲ期的癌組織中表達明顯低于正常組織（P＜0.05），HP在TNMⅠ期中表達最低，HP低表達與臨床TNM分期呈負相關(guān)（P＜0.05）；②在TNMⅢ和Ⅳ期ESCC中組織蛋白酶原D（Procathepsin D,pCD）表達顯著高于癌旁組織學正常黏膜組織（P＜0.05），在TNMⅠ和Ⅱ期中亦升高但無統(tǒng)計學意義；③在TNMⅠ期ESCC組織中超氧化物歧化酶3（Superoxide dism

8、utase3,SOD3）表達明顯高于癌旁正常組織（P＜0.05），但TNMⅡ和Ⅲ期中具有升高趨勢；④ESCC及癌旁組織中C3（Complement C3, C3）、人脯氨酸/精氨酸豐富端亮氨酸豐富蛋白（PRELP）和凝集素（Clusterin, CLU）的表達變化無明顯規(guī)律；⑤ESCC血清中HP的表達明顯高于食管黏膜炎癥及食管黏膜組織學正常血清（P＜0.05），而ESCC血清中Clusterin表達與HP相反，明顯低于食管黏膜炎癥及食管