1、人促血液血管細(xì)胞生長因子(Hemangiopoietin，HAPO)是一個(gè)作用于早期造血細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞系的細(xì)胞因子，能促進(jìn)早期造血和血管細(xì)胞的黏附、增殖和趨化。 核仁素(Nucleolin)作為一個(gè)RNA結(jié)合蛋白主要存在于細(xì)胞核內(nèi)，分子量為110kDa。后來研究發(fā)現(xiàn)nucleolin也存在于細(xì)胞質(zhì)中及細(xì)胞膜上，其功能涉及轉(zhuǎn)運(yùn)細(xì)胞因子及構(gòu)成細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)通路。 免疫共沉淀和免疫印記實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)EVC-304細(xì)胞中的nucleol

2、in能夠與HAPO特異性結(jié)合，這提示我們nucleolin可能成為HAPO的受體。因此，本實(shí)驗(yàn)選擇人nucleolin基因、nucleolin N端肽以及nucleolinC端肽作為免疫原，采用三種免疫方案，應(yīng)用雜交瘤技術(shù)，制備抗人nucleolin單克隆抗體。通過間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)、westernblot分析、間接免疫熒光試驗(yàn)、流式細(xì)胞術(shù)(FCM)、非競爭ELISA、ELISA相加試驗(yàn)等鑒定抗體的特異性。 實(shí)驗(yàn)

3、得到三株抗人nucIeolin N端肽單克隆抗體(分別命名為8G12、9E8、9E10)及抗人nucleolin C端肽多克隆抗體。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明8G12、9E8、9E10識(shí)別同一抗原表位；8G12、9E8及抗人nucleolinC端肽多克隆抗體既可與ECV-304、U937細(xì)胞中變性的nucleolin蛋白特異性結(jié)合也能夠與ECV-304、U937細(xì)胞表面天然的nucleolin分子特異結(jié)合；且8G12可與HAPO競爭性結(jié)合U937細(xì)胞