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![熱量限制延緩老年小鼠骨骼肌衛(wèi)星細胞增殖能力減退及其機制研究.pdf_第1頁](https://static.zsdocx.com/FlexPaper/FileRoot/2019-3/10/8/190a0d64-f6fe-42b6-8e40-a3753b5f8be4/190a0d64-f6fe-42b6-8e40-a3753b5f8be41.gif)
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文檔簡介
1、目的:探討不同年齡小鼠骨骼肌衛(wèi)星細胞增殖能力的變化,以及熱量限制對老齡小鼠骨骼肌衛(wèi)星細胞增殖能力的影響及其機制。
方法:本實驗分為三部分,第一部分探討不同年齡小鼠骨骼肌衛(wèi)星細胞增殖能力的變化。按年齡將C57BL小鼠分為三組:乳鼠(小于1周齡)、成年鼠(3-4月齡)、老年鼠(15-16月齡),分別取后肢骨骼肌以膠原酶及中性酶制備骨骼肌單核細胞懸液,采用流式細胞術(shù)(CD45-/CD11b-/Scal-1-/CXCR4+/β1-in
2、tegrin+分選方案)分選小鼠肌衛(wèi)星細胞及行細胞周期測定;Western blot法檢測周期蛋白Cyclin A、CyclinD1、CyclinE的表達。
第二部分探討熱量限制對老齡小鼠衛(wèi)星細胞增殖能力的影響。選取12~13月齡的C57BL雄性小鼠12只,按隨機數(shù)字表法均分為老年熱量限制組和老年自由飲食組,每組6只,均單籠飼養(yǎng)。實驗開始前,2組小鼠均適應(yīng)性飼養(yǎng)2周,計算平均進食量作為老年自由飲食組投食量,約75.09kJ/d
3、;老年熱量限制組采用熱量限制法投食,投食量為老年自由飲食組的60%,約45.05kJ/d。逐日投放飼料,每周稱量體重一次,至實驗第15周結(jié)束。分別比較2組小鼠熱量限制前和熱量限制第15周的體重和骨骼肌指數(shù)變化。分別取后肢骨骼肌制備單核細胞懸液,采用流式細胞術(shù)分選小鼠肌衛(wèi)星細胞,并進行細胞周期測定;用免疫印跡法檢測周期蛋白Cyclin A、Cyclin D1、Cyclin E的表達。
第三部分探討熱量限制對老年小鼠衛(wèi)星細胞增殖能
4、力影響的可能機制。AMPK和SIRT1是機體細胞和器官中能量代謝相關(guān)蛋白,分別取成年鼠、老年自由飲食組及老年熱量限制組肌肉提取蛋白,通過蛋白免疫印跡法檢測AMPKα、p-AMPKα、SIRT1的表達并比較。
結(jié)果:與成年鼠[G0/G1期(78.25±0.38)%;S+G2/M期(19.99±1.50)%]相比,乳鼠骨骼肌衛(wèi)星細胞的 G0/G1期(58.89±0.43%)比例降低(P<0.01),S期+G2/M期(37.53±0
5、.06%)比例升高(P<0.01),CyclinA(P<0.01)、CyclinE(P<0.01)表達增強,CyclinD1表達降低(P<0.01);老年鼠骨骼肌衛(wèi)星細胞的 G0/G1期(89.78±0.37)比例增高(P<0.01),S期+G2/M(10.40±0.70)期比例降低(P<0.01);CyclinA(P<0.01)、CyclinE(P<0.01)表達增強,CyclinD1表達減弱(P<0.05)。熱量限制前,老年熱量限制
6、組和老年自由飲食組小鼠體重分別為(30.7±0.4)g和(30.8±0.3)g,組間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05);熱量限制結(jié)束時,老年熱量限制組小鼠的體重降至(19.5±0.4)g,較組內(nèi)熱量限制前明顯降低(P<0.001),且明顯低于老年自由飲食組小鼠的體重[(31.9±0.5)g],組間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.001);老年熱量限制組與老年自由飲食組的脛前肌、腓腸肌及伸趾長肌的骨骼肌指數(shù)差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。與老年
7、自由飲食組[G0/G1期(89.78±0.37)%;S期(4.29±1.57)%]相比,老年熱量限制組骨骼肌衛(wèi)星細胞的 G0/G1期比例[(62.18±0.42)%]下降(P<0.001),S期比例(28.75±0.30%)顯著升高(P<0.001);Cyclin A(P<0.001)、Cyclin E(P<0.01)表達增強,Cyclin D1表達降低(P<0.01)。與成年組相比,老年組p-AMPKα/AMPKα和 SIRT1表達顯
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