新型組織工程化神經(jīng)導(dǎo)管對(duì)脊髓損傷的修復(fù)作用研究.pdf_第1頁(yè)
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1、背景:組織工程支架材料已被應(yīng)用于脊髓損傷的修復(fù),但其具有局限性,效果也不甚理想。
  目的:構(gòu)建復(fù)合聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)及紅景天苷微球的新型組織工程神經(jīng)導(dǎo)管支架材料,觀(guān)察其對(duì)脊髓損傷的修復(fù)作用,為將其應(yīng)用于臨床上脊髓損傷的修復(fù)提供基礎(chǔ)研究資料。
  方法:乳化-溶劑揮發(fā)法制備地塞米松、紅景天苷、絲裂霉素C微球,以包封率、載藥量以及收率的綜合評(píng)分為指標(biāo),通過(guò)正交試驗(yàn)考察投藥量、PLGA用量和聚乙烯醇(PVA)質(zhì)量

2、分?jǐn)?shù)對(duì)微球處方工藝的影響,掃描電鏡觀(guān)察微球表征。采用靜電紡絲技術(shù),以膠原蛋白和聚己內(nèi)酯(PCL)為原料制備纖維納米支架殼層。利用特制模具將微球混入膠原蛋白中制成支架材料的芯層,制成無(wú)微球組、地塞米松和紅景天苷微球組、絲裂霉素和紅景天苷微球組三組復(fù)合支架材料。三組材料分別與大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞共培養(yǎng)。建立Wistar大鼠脊髓損傷動(dòng)物模型,大鼠隨機(jī)分為無(wú)微球組、地塞米松和紅景天苷微球組、絲裂霉素和紅景天苷微球組,每組20只,分別于術(shù)后4周和

3、16周取材,標(biāo)本常規(guī)固定、切片、組織學(xué)(HE)染色。免疫熒光化學(xué)染色觀(guān)察S100,神經(jīng)絲蛋白(Neurofilament,NF),神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein,GFAP),巨噬細(xì)胞表面特異性標(biāo)志抗體(ED-1)的表達(dá),綜合評(píng)價(jià)其對(duì)脊髓損傷的修復(fù)效果。
  結(jié)果:紅景天苷微球最佳制備工藝為投藥量6mg,PLGA用量120mg,PVA質(zhì)量分?jǐn)?shù)1%。紅景天苷微球的載藥量、包封率和收

4、率分別為(3.86±0.03)%,(83.62±0.31)%,(90.67±2.35)%;地塞米松緩釋微球最佳制備工藝為投藥量10mg,PLGA用量80mg,PVA質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.5%,地塞米松微球的載藥量、包封率和收率分別為(2.26±0.03)%,(83.62±0.21)%和(90.87±2.45)%;絲裂霉素微球最佳制備工藝為投藥量200μg,PLGA用量60mg,PVA質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.5%,絲裂霉素微球的載藥量、包封率和收率分別為(4.

5、86±0.04)%,(76.62±0.52)%,(90.23±1.75)%;微球外觀(guān)圓整,表面光滑。大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在復(fù)合微球的材料上生長(zhǎng)狀況良好。大鼠術(shù)后4周和16周HE染色結(jié)果顯示,復(fù)合微球材料組可見(jiàn)材料明顯或完全降解及大量細(xì)胞長(zhǎng)入,而無(wú)微球材料組只有少量細(xì)胞長(zhǎng)入。免疫熒光染色結(jié)果顯示,無(wú)微球組,地塞米松和紅景天苷微球組,絲裂霉素和紅景天苷微球組S100、NF表達(dá)依次增強(qiáng);GFAP表達(dá)和ED-1表達(dá)依次減弱。復(fù)合PLGA微球組的

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