1、蛋白質(zhì)是生命內(nèi)最重要的生物大分子，是生命活動的物質(zhì)基礎(chǔ)，是生物體內(nèi)一切組織的基礎(chǔ)物質(zhì)。并在生命現(xiàn)象和生命過程中起著決定性的作用，它與營養(yǎng)、酶、病毒、免疫、物質(zhì)運輸、遺傳、生命等都有密切關(guān)系。對蛋白質(zhì)進行定量分析和特異識別探討生命機理是十分重要的，其濃度和結(jié)構(gòu)的研究在醫(yī)學(xué)及免疫等方面有著極其重要的意義，對生命奧秘的揭示、臨床診斷以及藥物篩選等領(lǐng)域的發(fā)展具有重要的意義。 在眾多的痕量蛋白的檢測方法中，熒光分析法因其具有靈敏度高、選擇

2、性好、動態(tài)響應(yīng)范圍寬以及測定條件更接近生命體的生理環(huán)境的優(yōu)點而在蛋白質(zhì)分析中應(yīng)用廣泛。熒光探針技術(shù)是利用物質(zhì)的光物理和光化學(xué)特性，在分子量級上研究溶液中蛋白質(zhì)高靈敏度的分析方法，因而近年來，隨著技術(shù)的不斷進步，熒光探針法作為一種檢測新型的蛋白定量檢測方法．以其干擾少、快速、靈敏度高、準(zhǔn)確、實用性而備受關(guān)注． 本文嘗試用熒光染料試劑燦爛甲酚藍(Brilliant Bresol Blue，BCB)和吖啶橙(Acridine Oran

3、ge,AO)作為熒光探針，通過熒光探針法對Fau蛋白的定量檢測進行了一系列的探索，通過系統(tǒng)研究兩種檢測體系的反應(yīng)條件，獲得確定的研究成果，主要內(nèi)容如下： l、分別以燦爛甲酚藍(brilliant cresol blue，BCB)和吖啶橙(Acridine Orange，AO)做為熒光探針，以人血清蛋白(HSA)作為蛋白質(zhì)模型分子，以Tris-HCI作為緩沖溶液作為介質(zhì)，討論了不同實驗條件，如溶液PH值，染料試劑的用量，試劑加入順

4、序，反應(yīng)時間，反應(yīng)溫度，溶液離子強度對熒光強度的影響，以此優(yōu)化了實驗條件。 2、通過實驗發(fā)現(xiàn)，在近似中性的范圍內(nèi)，燦爛甲酚藍(BCB)和人血清蛋白(HSA)結(jié)合，可使BCB溶液的熒光強度加強，且熒光強度的加強程度與蛋白質(zhì)的濃度具有較好的線性關(guān)系。其線性范圍為1×10.5-5mg/ml-2×10-2mg/ml，相關(guān)系數(shù)為0.9932，檢測限為9.93ng/ml，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=6)為3.09％，實驗表明該方法使用簡單方便，具有較

5、高的靈敏度． 3、通過實驗對A0.SDS—HSA三元熒光體系的研究發(fā)現(xiàn)，在一定的條件下，蛋白質(zhì)的加入可使AO-SDS形成的聚合體解散，從而使體系的熒光強度加強，且熒光強度的加強程度與蛋白質(zhì)的加入量成正比。其線性范圍為2×10-6mg/ml-2×10-2mg/ml，相關(guān)系數(shù)為0.9984，檢測限為1.82ng/ml，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.61％，該方法相比于前一種方法具有更高的靈敏度且具有較強的抗干擾能力。 4、論文還使用了上邊兩種探