1、心腦血管疾病正嚴重威脅著人類的健康，由其導致的死亡率呈逐年上升趨勢，動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)是其病理基礎。關于AS的發(fā)病機制存在多種學說，主要是由多種因素引起的慢性炎癥反應學說以及脂代謝紊亂學說，而在機體內慢性炎癥反應和脂代謝紊亂相互影響、共同參與并促進了AS發(fā)生發(fā)展。 載脂蛋白E基因缺失(apoE-/-)小鼠是目前常用的研究AS的模型，在普通飲食條件下可自發(fā)產生AS，隨著小鼠年齡的增長病變逐漸加重

2、，并且其．AS病變過程中呈現(xiàn)出的病理特征與人AS非常相似，因此apoE-/-小鼠是研究AS發(fā)生機制，揭示AS發(fā)生發(fā)展機理的優(yōu)良動物模型。 然而在apoE-/-小鼠AS發(fā)生早期，病變較輕、干擾因素較少的情況下，較系統(tǒng)的檢測炎癥相關基因的時序表達差異以及各基因之間的相互作用的報道尚不多見。為此，本實驗利用該小鼠為模型，檢測AS早期小鼠主動脈、肝臟和脾臟中多種炎癥相關基因的時序表達，旨在揭示在AS發(fā)生早期起關鍵作用的危險因子，并初步

3、探討其作用機理，為進一步深入開展分子生物學研究奠定基礎。 本實驗選用apoE-/-小鼠和具有相同遺傳背景(C57BL/6J)的野生型(wildtype，WT)小鼠為實驗對象，利用半定量RT-PCR以及Real-time RT-PCR技術，檢測apoE-/-小鼠在1、2和3月齡3個年齡段主動脈以及14天、1、2和3月齡4個年齡段肝臟和脾臟中炎癥相關基因的時序表達特點；并通過血清生化指標的檢測結合主動脈根部和肝臟病理形態(tài)學特征的分

4、析，探討炎癥相關基因的時序表達與AS早期病變的關系。 通過實驗得到如下結果： 1.利用半定量RT-PCR在主動脈檢測的11條炎癥相關基因中，apoE-/-與WT小鼠相比，1、2和3月齡時IL-1β的mRNA表達水平均顯著上調。1月齡時VCAM-1、IKB-α、rGF-β和SOD1，2月齡時PDGF-α和CD36，3月齡時TNF-α和MMP2的mRNA表達水平與同齡WT小鼠相比均顯著上調，其它年齡段無顯著變化；而Alb

5、umin在1和2月齡時顯著降低。在肝臟檢測的7條炎癥相關基因中，CRP和JAK1的mRNA表達水平在14天到2月齡時無顯著變化，3月齡時顯著上調。NF-kB在各年齡段apoE-/-小鼠主動脈和肝臟中的基因表達量與同齡WT。小鼠相比均無顯著差異。在肝臟中檢測的其它3條基因在14天至3月齡期間與同齡的WT小鼠相比并無顯著變化。在脾臟中檢測的8條炎癥相關基因中，apoE-/-與WT小鼠相比，2月齡時GM-CSF和SOD1的mRNA表達水平顯著

6、升高，其它均無顯著變化。 2.利用Real-time RT-PCR在主動脈檢測的8條炎癥相關基因中，3月齡時IL-1β mRNA表達水平與同齡WT小鼠相比升高約27倍，TNF-α mRNA在1月齡和3月齡時表達水平與同齡WT小鼠相比分別升高約3倍和2倍，3月齡時MCP-1基因表達水平升高約3倍，1月齡和3月齡時ICAM-1基因表達水平均顯著上調約3倍，1月齡和3月齡時VCAM-1基因表達水平均顯著上調約23倍和2倍，1月齡和3月齡時GM

7、-CSF基因表達水平與同齡WT小鼠相比均上調，NF-kB和IxB-α基因在1和3月齡時均無顯著變化。 3.14天至3月齡4個年齡段的apoE-/-小鼠血清TC、LDL-C和HDL-C水平均顯著高于同齡WT小鼠；TG水平從1月齡開始比同齡WT小鼠顯著升高，并隨小鼠年齡的增長呈現(xiàn)明顯的上升趨勢。 4.1月齡apoE-/-小鼠主動脈內膜出現(xiàn)光鏡下可見的輕微的脂質沉積，沉積面積較小，主要分布在主動脈瓣膜附近，隨年齡增長病變逐

8、漸加重，到3月齡時脂質沉積面積變大、沉積的數量變多，也不僅僅局限在瓣膜處。 5.肝臟病理形態(tài)切片觀察發(fā)現(xiàn)apoE-/-小鼠從1月齡開始，肝臟細胞內出現(xiàn)光鏡下可見的脂肪滴，脂肪滴較小且數量較少，隨小鼠年齡增長脂肪滴逐漸變大，數量變多，直至形成空泡，表現(xiàn)出明顯的肝細胞脂質堆積和肝臟脂肪性病變。 以上實驗結果顯示，隨著小鼠年齡的增長，AS病變逐漸加重，炎癥相關基因與WT小鼠相比，出現(xiàn)時序性差異表達，這些時序表達差異的炎癥相