1、目的：
　　宮內(nèi)發(fā)育遲緩（Intrauterine growth retardation，IUGR）是指由于胎兒、母親或胎盤等各種不利因素導(dǎo)致胎兒在宮內(nèi)生長模式偏離或低于其生長預(yù)期，即偏離了其遺傳潛能。通常是指新生兒出生體重小于同胎齡兒平均出生體重的第10個百分位或2SD的嬰兒。受雙親遺傳因素、孕婦營養(yǎng)狀況、地理環(huán)境、藥物、微量元素、子宮胎盤血流量、宮內(nèi)感染等多種因素影響。宮內(nèi)發(fā)育遲緩不僅會造成圍產(chǎn)期死亡率增加，目前研究表明宮內(nèi)發(fā)

2、育遲緩者遠(yuǎn)期并發(fā)癥（如神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育障礙及成年后患冠心病、高血壓病、糖尿病、腎病等）的危險度比正常出生體重兒明顯增加。
　　Hales和Barker提出的“節(jié)儉表型假說”，Lucas于1998年提出了“營養(yǎng)程序化(nutritional Programming)”的概念，用以闡述早期營養(yǎng)不良對成年期的持續(xù)影響，但詳細(xì)機(jī)制尚不清楚。研究發(fā)現(xiàn)宮內(nèi)發(fā)育遲緩個體的胰腺β細(xì)胞發(fā)育受損，我們可以通過研究胰腺發(fā)育的相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)情況，揭示宮內(nèi)發(fā)

3、育遲緩個體胰腺發(fā)育受損的原因。
　　利用低蛋白飲食建立IUGR模型，研究胰腺發(fā)育的相關(guān)因子Pdx1、Nkx2.2、Nkx6.1和MafA在IUGR的表達(dá)情況，可以探究IUGR個體易發(fā)生Ⅱ型糖尿病的可能機(jī)制。
　　方法：
　　一、動物實(shí)驗
　?。ㄒ唬?shí)驗動物
　　清潔級Wistar大鼠18只，其中雄性3只，雌性15只，體重250～290g。
　?。ǘ?shí)驗方法
　　1、動物模型制備
　　適應(yīng)

4、性飼養(yǎng)7天后，雌雄鼠按5∶1比例合籠，次晨8:00-9:00時涂片，以鏡下見精子作為受孕第1天，孕鼠按受孕順序隨機(jī)分為低蛋白組和對照組，用孕鼠低蛋白飲食法建立IUGR模型。低蛋白組自妊娠第1天起給予低蛋白飼料（蛋白含量6％～8％）喂養(yǎng)，對照組給予標(biāo)準(zhǔn)飼料（蛋白含量18％）喂養(yǎng)直至自然分娩，飼料其余成分相同或相近，兩組飲水無限制。所有孕鼠均自然分娩，于娩出后12h內(nèi)稱量新生大鼠體重，精確到0.01g，低蛋白組新生大鼠體重低于對照組新生大鼠

5、平均體重2個標(biāo)準(zhǔn)差的納入IUGR組。
　　2、標(biāo)本取材
　　稱量低蛋白組及對照組新生大鼠體質(zhì)量、鼻尾長，將符合IUGR標(biāo)準(zhǔn)的新生大鼠和對照組新生大鼠處死，顯微解剖鏡下完整分離胰腺，用分析天平稱量胰腺重量，迅速將胰腺置于4％多聚甲醛溶液中固定，準(zhǔn)備做石蠟切片，準(zhǔn)備進(jìn)行HE染色和免疫組化。隨機(jī)挑選IUGR組和對照組新生大鼠各12只，處死前禁食6小時，心臟采血測定空腹血糖。腹腔注射葡萄糖2g/Kg體重，測定糖負(fù)荷后30分鐘、60分

6、鐘和120分鐘血糖值。
　　3、胰腺組織的鏡下觀察
　　4、免疫組織化學(xué)法檢測Nkx2.2和Nkx6.1的表達(dá)。
　　5、實(shí)時熒光定量PCR檢測Pdx1、MafA和Nkx6.1 mRNA的表達(dá)。
　　二、統(tǒng)計學(xué)方法
　　采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件處理，數(shù)據(jù)以（x）±s表示，符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)組間比較采用t檢驗。不符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)采用秩和檢驗;以P＜0.05為具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　

7、一、低蛋白飲食組IUGR造模情況
　　低蛋白組新生大鼠體重，身長（鼻尾長）均顯著低于對照組(P＜0.05)低蛋白組。
　　二、IUGR組和對照組新生大鼠葡萄糖耐量實(shí)驗結(jié)果比較
　　IUGR組新生大鼠空腹血糖低于對照組(t=2.16，P＜0.05)，予以糖負(fù)荷后30分鐘、60分鐘差別無統(tǒng)計學(xué)意義，120分鐘時，血糖高于正常組。（t=5.438，P＜0.05）
　　三、IUGR組和對照組新生大鼠胰腺發(fā)育情況
　

8、　新生大鼠IUGR組HE染色后可看出胰腺形態(tài)較正常組松散，胰島數(shù)量減少，胰島面積減少。胰腺重量較對照組胰腺重量減少，P＜0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　四、IUGR組和對照組新生大鼠Nkx2.2表達(dá)情況的比較
　　Nkx2.2在胰島細(xì)胞的胞漿表達(dá)，部分腺泡上皮細(xì)胞的胞核表達(dá)，陽性反應(yīng)部位呈棕黃色。IUGR組陽性反應(yīng)部位的平均光密度，與對照組陽性反應(yīng)部位平均光密度相比略有減低，但P＞0.05，無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　Nkx2.2

9、在IUGR組陽性反應(yīng)面積，與對照組陽性反應(yīng)面積相比顯著降低，P＜0.05，有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　五、IUGR組和對照組新生大鼠Nkx6.1表達(dá)情況的比較
　　Nkx6.1在胰島細(xì)胞的胞漿表達(dá)，陽性反應(yīng)部位呈棕黃色，IUGR組陽性反應(yīng)部位的平均光密度對照組陽性反應(yīng)部位平均光密度相比顯著降低，P＜0.01，有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　NKx6.1在IUGR組陽性反應(yīng)面積與對照組陽性反應(yīng)面積相比顯著降低，P＜0.05，有統(tǒng)計學(xué)意義。<

10、br>　　六、IUGR組Pdx1、MafA、Nkx6.1mRNA相對表達(dá)量
　　RT-PCR結(jié)果顯示，IUGR組Pdx1 mRNA相對表達(dá)量低于對照組，P＜0.05，IUGR組MafA mRNA相對表達(dá)量低于對照組，P＜0.05，IUGR組Nkx6.1 mRNA相對表達(dá)量低于對照組(P＜0.01)，有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論：
　　宮內(nèi)發(fā)育遲緩的新生大鼠胰腺中發(fā)育相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子Pdx1、MafA和Nkx6.1的表達(dá)均有減低