1、目的：以雙鏈重組 AAV9(dsAAV9)型腺相關(guān)病毒為載體介導的FrzA基因轉(zhuǎn)染心肌細胞炎癥損傷模型，觀察是否能抑制心肌細胞 Wnt通路表達活性，從而減輕心肌細胞凋亡，促進細胞存活。
　　方法：利用 TNF-α刺激 H9c2心肌細胞建立心肌細胞炎癥損傷模型，模擬體內(nèi)心肌缺血狀態(tài)， MTT法檢測細胞活性及 AnnexinV-FITC/PI雙染法檢測心肌細胞凋亡率，確定 TNF-α最佳濃度。dsAAV9介導 FrzA基因轉(zhuǎn)染心肌細胞

2、， Western blot檢測各組細胞 Wnt通路關(guān)鍵分子蛋白的表達，RT-PCR檢測各組細胞 Wnt通路關(guān)鍵分子 mRNA的表達。Western blot檢測各組細胞凋亡相關(guān)蛋白的表達， AnnexinV-FITC/PI雙染法檢測各組心肌細胞凋亡率的變化。
　　結(jié)果：
　?。?）免疫熒光結(jié)果顯示心肌細胞的純度可達到98％以上。
　?。?） MTT與 AnnexinV-FITC/PI雙染法結(jié)果顯示 TNF-α濃度對心

3、肌細胞活性的影響是以劑量依賴的方式，隨著 TNF-α的濃度增加，心肌細胞活性降低，細胞凋亡率增高，應(yīng)選擇濃度50μg/L的TNF-α來建立心肌細胞炎癥損傷模型。
　?。?） Western blot及 RT-PCR結(jié)果均顯示 TNF-α可有效激活 Wnt信號通路，且 FrzA基因轉(zhuǎn)染可抑制 Wnt信號通路的活性。
　　（4） Western blot及 AnnexinV-FITC/PI雙染法結(jié)果顯示，TNF-α激活 Wnt信

4、號通路后，細胞凋亡增多。而 dsAAV9介導 FrzA基因轉(zhuǎn)導可有效減輕 TNF-α誘導的心肌細胞凋亡，并且這種抗凋亡作用有可能正是通過抑制 Wnt信號通路來實現(xiàn)的。
　　結(jié)論：CMV啟動子介導的dsAAV9載體可高效的轉(zhuǎn)染心肌細胞，TNF-α刺激體外培養(yǎng)的心肌細胞可建立心肌細胞炎癥損傷模型，模擬體內(nèi)心力衰竭狀態(tài)，激活 Wnt信號通路，誘導心肌細胞凋亡。DsAAV9介導 FrzA基因轉(zhuǎn)染可抑制心肌細胞 Wnt信號通路的表達活性，可