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文檔簡介
1、目的:先從小鼠肝組織中克隆ING4基因并構(gòu)建真核表達載體pcDNA3.0-ING4,研究ING4對人肝癌SMMC7721細胞、人宮頸癌Hela細胞、人胃癌SGC7901細胞的作用;再構(gòu)建原核表達載體pET-21a(+)-ING4并表達純化和制備多克隆抗體。 方法:采用RT-PCR技術從小鼠肝組織中克隆ING4基因,將其構(gòu)建至pUCm-T載體上,經(jīng)測序鑒定正確后,再構(gòu)建重組表達質(zhì)粒pET-21a(一)-ING4和pcDNA3.0-I
2、NG4,采用PCR、雙酶切和基因測序鑒定。(1)利用陽離子脂質(zhì)體Lipofectamine分別將pcDNA3.0-ING4轉(zhuǎn)入COS-7細胞、人肝癌SMMC7721細胞、人宮頸癌Hela細胞、人胃癌SGC7901細胞。然后分別用RT-PCR、流式細胞儀、激光掃描共聚焦顯微鏡及Hoechst33258核染色等方法鑒定ING4基因的表達和研究其對幾種腫瘤細胞的抑制作用,同時還將ING4和IL-24對SMMC7721細胞的作用進行比較。(2)
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