PAK1重組蛋白的表達(dá)及其在細(xì)胞內(nèi)的定位.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、　　目的：本研究通過觀察PAK1重組蛋白在原核細(xì)胞中的表達(dá)情況及PAK1在真核細(xì)胞中的定位，為進(jìn)一步研究PAK1的生物學(xué)性能提供理論和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 　　方法：1.總RNA提取及cDNA合成：總RNA提取按照RNA提取protocol操作完成；在M-MuLVReverseTranscriptase作用下逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。2.以cDNA為模板擴(kuò)增PAK1依據(jù)PAK1序列，設(shè)計(jì)2對(duì)引物，建立PCR反應(yīng)體系，擴(kuò)增PAK1。3.重組質(zhì)粒的構(gòu)建將P

2、AK1基因克隆到GST融合蛋白原核表達(dá)載體pGEX-5X-1中，構(gòu)建重組質(zhì)粒pGEX-5X-1/PAK1；同時(shí)，利用基因重組技術(shù)將PAK1基因克隆到GFP融合蛋白真核表達(dá)載體pEGFP中，構(gòu)建重組質(zhì)粒pEGFP/PAK1。4.GST-PAK1融合蛋白表達(dá)用pGEX-5X-1/PAK1重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21，進(jìn)行SDS-PAGE電泳。5.WesternblottingSDS-PAGE電泳結(jié)束后將兩塊凝膠分別轉(zhuǎn)移至2張PVDF膜上，其

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