釀酒酵母GSH 2基因的克隆和原核表達載體的構建.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、還原型谷胱甘肽(L-Glutathione)簡稱為GSH,是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸構成的三肽,其中谷氨酸是以γ-羧基與半胱氨酸形成肽鍵。GSH存在于所有生物細胞中,在酵母和動物中含量較高,在植物體內含量較少。谷胱甘肽在抗氧化、保護生物體內蛋白質的巰基、結合自由基保護細胞、解除外源性有毒物質的毒性和氨基酸的轉運等起到重要作用,對植物的抗旱、抗重金屬等也有重要意義。GSH在醫(yī)學上可以作為解毒劑用于有機溶劑等中毒治療,同時在抗氧化和防止皮

2、膚老化方面都有廣泛運用,在食品工業(yè),GSH作為生物活性添加劑被積極用于開發(fā)保健食品。 谷胱甘肽在酵母菌中的合成由γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(GSH1)和谷胱甘肽合成酶(GSH2)催化完成,酵母、擬南芥等生物體內的GSH合成酶系相繼被克隆和分析。在目前研究的大部分生物體內γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶是GSH合成中的限速酶,受GSH的反饋抑制,但已經發(fā)現(xiàn)在某些大腸桿菌菌株中卻是GSH2做為GSH合成的關鍵酶,此外,在某些逆境條件下GSH1

3、是否可作為GSH合成途徑中的關鍵酶仍有爭議。比如,在Cd(鎘)脅迫條件下,GSH1可能不再是GSH合成的限制性酶,因為Cd脅迫會消耗植物體內的GSH,GSH對GSH1的反饋抑制被解除。 本文以釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)基因組DNA為模板,通過PCR擴增獲得了谷胱甘肽合成酶基因(gsh2),構建原核表達質粒pET-32a(+)-gsh2,轉化到大腸桿菌BL21(DE3)中,并且對該載體在大腸桿菌中

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