1、釀酒酵母系統(tǒng)是最重要的外源基因表達系統(tǒng)之一。釀酒酵母存在高效的同源重組機制，兩個DNA分子間只要有30-50bp長的同源區(qū)段就可以準確、有效地進行同源重組。本論文旨在利用同源重組技術構建兩類新型釀酒酵母表達載體——不含大腸桿菌質粒序列、穩(wěn)定性高的pHR系列表達載體和適合小分子多肽與人超氧化物歧化酶融合表達的載體pRSODF。為了構建不含大腸桿菌抗藥性質粒序列，具有高穩(wěn)定性的pHR系列表達載體，我們先在載體pHC11的基礎上構建了載體pH

2、C11R，然后以人α2b干擾素基因和乙肝病毒融合抗原基因SA28為試驗基因，通過PCR擴增這兩個基因的表達單元，并在它的兩端引入同源重組所需的序列，將它們分別與pHC11R去除大腸桿菌質粒序列的DNA片段共轉化釀酒酵母DCO4，得到表達人α2b干擾素和表達乙肝病毒融合抗原SA28的工程菌：DCO4/pHC11R-IFNα2b和DCO4/pHC11R-SA28。為了使構建的載體能適應不同類型的外源基因的表達需要，本文還進一步構建了pHR系

3、列載體。根據(jù)人胰島素原與人SOD融合可以在釀酒酵母中獲得高效表達的文獻報道，本文以我們先期構建的含有人SOD表達單元的質粒F2-hSOD為基礎，建成了可以用同源重組構建小分子多肽與人SOD融合表達的載體pRSODF。在構建時還在小分子多肽與人SOD的連接區(qū)插入腸激酶識別位點，這樣可以使小分子多肽能從融合蛋白中切割下來。為了驗證這個載體在實際應用中的可行性，一個編碼28個氨基酸的胸腺肽α1基因被用做試驗基因。通過PCR擴增胸腺肽α1基因，