甲烷利用細(xì)菌的篩選及可溶性甲烷單加氧酶基因簇的克隆.pdf_第1頁(yè)
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1、該研究利用傳統(tǒng)微生物學(xué)的方法,從南寧市廣西大學(xué)田的土樣中篩選到一株甲烷利用細(xì)菌Y2(83),能夠在以甲烷為唯一碳源和能源的無(wú)機(jī)培養(yǎng)基上生長(zhǎng),通過(guò)形態(tài)觀察及16SrRNA編碼序列同源性比較分析,我們初步鑒定該菌株為甲基孢囊菌.通過(guò)對(duì)Y2(83)菌株在不同溫度、pH值條件下的生長(zhǎng)的情況,我們初步確定了Y2(83)的最適生長(zhǎng)和降解苯酚的溫度為32℃,最適pH值為7.0,TCE最高的耐受濃度為30mg/L.苯胺最高的耐受濃度為1500mg/L.

2、苯酚最高的耐受濃度為800mg/L.根據(jù)可溶性甲烷單加氧酶(sMMO)所共有的保守序列設(shè)計(jì)合成了一對(duì)引物,以Y2(83)總DNA為模板,通過(guò)PCR反應(yīng),擴(kuò)增出242bp的同源片段.對(duì)該DNA序列測(cè)序,并通過(guò)序列分析表明,該片段與已報(bào)道的可溶性甲烷單加氧酶的編碼基因中的mmoX有85％的同源性.以此DNA片段為探針,通過(guò)Southern blot的方法,從用部分酶切的Y2(83)總DNA中獲得陽(yáng)性印跡,確認(rèn)其可溶性甲烷單加氧酶的編碼基因的

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