1、r HJ I I I f t l l ] JJ IJ I I I f ] JJ I I tr l l J I I I I f lr l r l l IJ I l [Y 3 2 3 1 8 9 1分類號 B 箜2Z 】U O c §! Q 密趣坌墨學校代號學 號T 0 5 7 22 0 1 4 11 0 1 0 2 4廣州中醫(yī)藥大學G u a n g z h o u U n i v o r s i t y o f C h i r

2、 t o s o M e d i c i n e碩士學位論文基于經(jīng)典W n t ／B - c a t e n i n 信號通路探討E G C G對人子宮肌瘤細胞作用的研究學位申請人指導教師姓名專 業(yè) 名 稱申請學位類型論文提交日期胡光云全小明護理學科學學位2 0 1 7 年6 月摘 要目的：1 ．改良人子宮肌瘤原代細胞的培養(yǎng)方法，提高人子宮肌瘤原代細胞的貼壁率，縮短首次傳代的時間。2 ．探討E G C G 對人子宮肌瘤細胞增殖凋亡的影響

3、，以及對經(jīng)典W n t ／B —c a t e n i n 信號通路相關(guān)蛋白W n t 5 b 、B —c a t e n i n 、E G F R 的表達影響，以期闡明綠茶多酚治療子宮肌瘤的作用機制，從而豐富中醫(yī)食療臨床適用范圍。方法：1 ．在手術(shù)取下肌瘤組織后放入4 “ C H a n k s 液中，延長細胞消化時間，組織塊二次消化等改良方法獲取原代子宮肌瘤細胞。2 ．綠茶多酚0 u M 、5 0 u M 、1 0 0 u M 、2

4、 0 0 m M 干預子宮肌瘤細胞2 4 h 、4 8 h 、7 2 h 后，采用C C K 8 法檢測E C G C 對人子宮肌瘤細胞生長的影響，F(xiàn) C M 檢測細胞增殖抑制率；倒置顯微鏡下觀察E G C G ( 0 、5 0 、1 0 0 、2 0 0 u M ) 處理2 4 h 、4 8 h 、7 2 h 后細胞的形態(tài)學變化。免疫組織化學法檢測W n t 5 b 、B - c a t e n i n 在各組子宮肌瘤細胞表達情況；采

5、用W e s t e r n ．b l o t 檢測法檢測細胞W n t b 、B —c a t e n i n 、E G F R 的表達。成果：1 ．人子宮肌瘤有限細胞系培養(yǎng)成功．2 ．改良方法優(yōu)于常規(guī)組：細胞獲取量( 2 ．3 3 士0 ．4 8V S1 ．1 6 + 0 ．2 9 ) x 1 0 8 個／L ，細胞貼壁率( 4 1 ．3 3 + 7 ．4 3V S 2 2 ．0 7 士6 ．8 2 ) ％；首次傳代時間( 1 0

6、．2 7 + 1 ．6 7V S1 4 ．6 7 士1 ．1 8 )天，P 值均小于0 ．0 5 ；傳代次數(shù)( 6 ．6 0 + 0 ．8 3V S 6 ．3 3 + 0 ．7 2 ) 次，P > 0 ．0 5 ：凍存后復蘇成功率均為1 0 0 ％，無明顯差異。顯微鏡下細胞顯典型的“峰．谷”狀生長，胞漿內(nèi)表達S M a ．a(chǎn) c t i n ) ，細胞純度達9 8 ％以上。3 ．各組子宮肌瘤細胞的體外生長曲線形態(tài)良好，倒置顯微鏡下

7、可見對照組的人子宮肌瘤細胞呈梭形或多邊形貼壁生長，數(shù)量密集，輪廓清楚，細胞間連接緊密。C C K 一8結(jié)果顯示，與對照組相比，E G C G 以劑量．時間依賴性的方式抑制子宮肌瘤細胞的增殖。加藥組作用2 4 小時即出現(xiàn)抑制率( 尸< 0 ．0 5 ) ，隨著作用時間的延長，抑制率增加。4 ．F C M 結(jié)果顯示，人子宮肌瘤細胞的凋亡率隨著E G C G 濃度的增加而升高。5 一組織免疫化學法、W e s t e r n ．b l