耐熱超氧化物歧化酶基因的克隆表達及蛋白的純化、相關(guān)酶學(xué)性質(zhì)研究.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩63頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)

文檔簡介

1、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD,EC1.15.1.1)是一種廣泛存在于動一植物和微生物中的金屬酶。它催化超氧化物陰離子自由基(O2-)發(fā)生歧化反應(yīng),從而清除O2-,在維持生物體內(nèi)超氧陰離子自由基產(chǎn)生與消除的動態(tài)平衡中起著重要的作用。根據(jù)結(jié)合的金屬離子不同,超氧化物歧化酶分為三類:第一類是Cu,Zn-SOD,第二類能與Fe2+或Mn2+或者兩者中的任意一個都能結(jié)合,即Fe-SOD,Mn-SOD或Fe/Mn

2、-SOD,第三類是Ni-SOD。 我們從一株地?zé)嵫挎邨U菌(Geobacillus)的菌株中克隆得到三種sod基因,F(xiàn)e/Mn-sod,Mn-sod和Cu/Zn-sod。分析表明三種SOD分別與Geobacillus kaustophilus HAT426菌株相應(yīng)的SOD序列同源性最高。克隆這三個基因到畢赤酵母表達載體pPIC9中,電擊轉(zhuǎn)化宿主菌GS115,發(fā)現(xiàn)一株有微弱表達。克隆Mn-sod基因到原核表達載體pET-28a中,轉(zhuǎn)

3、化大腸桿菌BL21菌株,蛋白表達量很高。蛋白純化后比活達2726.7U/mg。該酶在60 ℃高度穩(wěn)定,80℃作用2.5個小時仍有70%的活力,90℃作用2.5個小時還有30%的活力。離子重組實驗表明Mn2+對維持酶的活性非常重要。根據(jù)活性和非活性SDS-PAGE試驗的結(jié)果,推測此酶為同型四聚體結(jié)構(gòu)。 為獲得東方粘蟲顆粒體病毒(Pseudelatia separata granulovirus,PsGV)基因組序列,本實驗室采用隨

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論