1、植物在生長發(fā)育的過程中會(huì)受到各種各樣的逆境脅迫，產(chǎn)生對植物體有害的自由基。當(dāng)下，通過分子生物學(xué)等技術(shù)手段從植物中分離抗逆基因，并轉(zhuǎn)入到農(nóng)作物中進(jìn)行表達(dá)，是培育抗逆高產(chǎn)品種，提高作物產(chǎn)量的重要手段。超氧化物歧化酶(SOD)是清除植物體內(nèi)活性氧的一種重要抗氧化酶類。研究發(fā)現(xiàn)，植物體內(nèi)SOD酶活性的高低和植物的抗逆性密切相關(guān)，而且過表達(dá)SOD基因能明顯提高植物對鹽脅迫的抵御能力。本論文選取小麥煙農(nóng)19為材料，采用RACE技術(shù)克隆出小麥FeSO

2、D基因，并進(jìn)行序列分析;構(gòu)建原核表達(dá)載體，在大腸桿菌中表達(dá)，并優(yōu)化了誘導(dǎo)表達(dá)條件;用熒光定量PCR技術(shù)分析該基因在不同逆境脅迫下的表達(dá)差異。
　　研究結(jié)果如下:
　　1.通過簡并引物擴(kuò)增和RACE技術(shù)，克隆出小麥FeSOD基因。小麥FeSOD（GenBank注冊號(hào):JX398977）全長為1397bp，開放閱讀框長594bp，推測編碼197個(gè)氨基酸，分子量約為22.8KDa，等電點(diǎn)(PI)為5.382，其氨基酸序列與玉米、水

3、稻等物種具有高度的同源性。
　　2.根據(jù)獲得FeSOD基因序列設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增編碼區(qū)，并在引物上引入NotⅠ和BamHⅠ酶切位點(diǎn)。構(gòu)建原核表達(dá)載體pETDuetl/FeSOD，并轉(zhuǎn)化大腸桿菌E.coli Rosetta(DE3)進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)。經(jīng)SDS-PAGE電泳檢測發(fā)現(xiàn)蛋白條帶大小與預(yù)期一致，WesternBlot成功檢測到組蛋白，目的蛋白成功表達(dá)。通過優(yōu)化IPTG濃度、誘導(dǎo)時(shí)間和誘導(dǎo)溫度確定重組菌最佳誘導(dǎo)表達(dá)條件為0.5mmol/

4、L的IPTG，誘導(dǎo)5小時(shí)，37℃。
　　3.通過熒光定量技術(shù)，分析小麥FeSOD基因不同逆境脅迫下的表達(dá)差異。結(jié)果表明:在逆境脅迫下，F(xiàn)eSOD基因的表達(dá)量大體呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢。在37℃高溫，4℃低溫，不同的鹽濃度，300mmol的鹽，30％的PEG-6000和100μmolABA脅迫下，F(xiàn)eSOD基因的表達(dá)量分別在3h、1h、200mmol、6h、48h和24h時(shí)最高，分別為對照的34倍、4.5倍、4.3倍、5.8倍、13