褶紋冠蚌超氧化物歧化酶基因和溶菌酶基因的分子克隆及表達(dá)特征.pdf_第1頁(yè)
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1、褶紋冠蚌(Cristariaplicatal)是我國(guó)重要的“淡水育珠蚌”之一,開(kāi)展其分子免疫的研究不僅具有理論意義,而且具有重要的應(yīng)用價(jià)值。本文對(duì)褶紋冠蚌超氧化物歧化酶(CpSOD)和溶菌酶(CpLYS)的cDNA進(jìn)行了克隆,并研究了這兩種酶的表達(dá)特征。 利用RACE-PCR及同源克隆方法,克隆出CpSODcDNA全長(zhǎng)和CpLXS的部分cDNA。CpSOD基因全長(zhǎng)891bp,其中編碼區(qū)468bp,5’端不翻譯區(qū)83bp,3’端不

2、翻譯區(qū)340bp(含ployA尾24bp)。該基因序列開(kāi)放閱讀框編碼155個(gè)氨基酸,預(yù)測(cè)的分子量大小為15.8kDa,等電點(diǎn)為5.80。通過(guò)多序列比對(duì)結(jié)果發(fā)現(xiàn),CpSOD和許多動(dòng)物的Cu/Zn-SOD相似,均含有保守的4個(gè)銅結(jié)合位點(diǎn)和4個(gè)鋅結(jié)合位點(diǎn),信號(hào)肽預(yù)測(cè)未發(fā)現(xiàn)信號(hào)肽,表明CpSOD是胞質(zhì)Cu/Zn-SOD。BLAST分析顯示CpSOD與其它動(dòng)物的Cu/Zn-SOD有很高的同源性,利用不同動(dòng)物的胞質(zhì)Cu/Zn-SOD氨基酸序列構(gòu)建系

3、統(tǒng)發(fā)育樹(shù),結(jié)果表明褶紋冠蚌與太平洋牡蠣、櫛孔扇貝、紫貽貝共同形成一個(gè)小分支。CpLYS的部分cDNA包括530bp,3’端不翻譯區(qū)259bp(含ployA尾29bp),共編碼89個(gè)氨基酸殘基。BLAST分析發(fā)現(xiàn)CpLYS的部分cDNA序列與其它動(dòng)物的i-型溶菌酶有較高的同源性,所以推測(cè)CpLYS為i-型溶菌酶。 利用RT-PCR分析檢測(cè)CpSOD和CpLYS基因在注射嗜水氣單胞菌后的表達(dá)情況,結(jié)果表明經(jīng)注射嗜水氣單胞菌后,血細(xì)胞

4、中CpSOD基因的表達(dá)明顯增加,到12h后達(dá)到最大值,隨后表達(dá)下降,至48h后恢復(fù)至原有水平;而CpLYS基因在注射嗜水氣單胞菌后表達(dá)量一直增加,至48h后達(dá)到最大值,結(jié)果說(shuō)明褶紋冠蚌在受到病原體侵害后,其體內(nèi)的超氧化物歧化酶和溶菌酶在免疫中均具有防御作用。 利用RT-PCR分析檢測(cè)CpSOD和CpLYS在各組織中的表達(dá)情況,結(jié)果表明,CpSOD基因在血液、外套膜、鰓、肝胰腺和閉殼肌中均有表達(dá),CpLYS基因在血液、外套膜、鰓、

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