1、目的： 分離純化人子宮內膜腺上皮細胞、腔上皮細胞及間質細胞，建立體外子宮內膜細胞的三維立體培養(yǎng)模型，利用該模型進行胚胎植入及子宮內膜容受性機制的研究，觀察不同濃度孕酮對體外三維立體培養(yǎng)的人子宮內膜上皮細胞胞飲突形成的影響，為臨床體外受精一胚胎移植后黃體期孕酮補充劑量的選擇提供理論依據(jù)。 方法: 選取2006年3～6月份因子宮肌瘤在中國醫(yī)大盛京醫(yī)院行全子宮切除術及次全子宮切除術的婦女，年齡20～45歲、月經(jīng)周期規(guī)律

2、(24～35天)、術前3個月內無激素應用史，增生期子宮內膜(月經(jīng)7～14天)，術后經(jīng)病理證實且內膜無病變。子宮離體后，立即在手術室，無菌條件下用刮匙刮取子宮內膜，消化后篩網(wǎng)分離取得上皮細胞和間質細胞，然后利用其不同貼壁時間進行純化，培養(yǎng)3～5天后，將其三維立體培養(yǎng)，培養(yǎng)物分三層，最底層為膠原與問質細胞混合物，其上為一薄層Matrigel膠，最上層為腺上皮細胞，培養(yǎng)重建子宮內膜，培養(yǎng)液中給予不同濃度的孕激素，10<'-8>mol/L、10

3、<'-7>mol/L，不加孕激素做陰性對照，雌激素濃度均為10<'-9>mol/L，光鏡下觀察細胞三維結構，掃描電鏡觀察細胞表面形態(tài)及胞飲突形成情況，透射電鏡觀察細胞超微結構。 結果: 分離純化后原代培養(yǎng)的子宮內膜上皮細胞呈旋渦狀生長，其純度達92％，子宮內膜間質細胞呈梭形生長，純度可達95％以上；光鏡下見三維培養(yǎng)的腺上皮細胞單層柱狀生長，細胞有極性，間質細胞于其下散在生長；掃描電鏡可見上皮細胞融合，加孕激素上皮表面可見

4、胞飲突結構，不加孕激素未見胞飲突形成，不同濃度孕激素胞飲突形成數(shù)目無明顯差異，均覆蓋細胞表面積的5％左右，透射電鏡超微結構可見腺上皮細胞間緊密連接與縫隙連接及橋粒連接，并可見細胞內粗面內質網(wǎng)及胞質內豐富的分泌顆粒。 結論: 人子宮內膜上皮細胞及間質細胞分離效果好，細胞純度高，利用增殖期的子宮內膜上皮細胞及間質細胞體外培養(yǎng)可以建立子宮內膜的三維立體模型；證明了胞飲突形成依賴孕激素的作用；而且孕激素誘導胞飲突形成具有飽和作用