1、目的：
　　鎂合金因其優(yōu)良的機(jī)械性能以及可生物降解吸收等特點(diǎn)，在骨科生物支架材料方面具有良好的應(yīng)用前景。本課題主要探討鈣磷涂層多孔鎂合金與人 BMSCs的組織相容性以及其作為軟骨支架的可行性以及其對(duì)成軟骨分化的影響。
　　材料與方法：
　　1．原代分離和培養(yǎng)人BMSCs，行成骨、成軟骨和成脂肪細(xì)胞分化鑒定人BMSCs的多向分化能力；
　　2．激光打孔法制備多孔鎂合金支架，行鈣磷涂層以提高鎂合金的耐腐蝕性；通過(guò)掃描

2、電鏡觀察鎂合金涂層的表面形態(tài)；通過(guò)掃描電鏡和激光共聚焦顯微鏡觀察人BMSCs在鈣磷涂層鎂合金表面的粘附情況；通過(guò)MTT評(píng)估浸提液對(duì)細(xì)胞活性的影響；
　　3．將人BMSCs接種到鈣磷涂層鎂合金支架和未涂層鎂合金支架中，采用β-TCP三維支架作為對(duì)照組，體外進(jìn)行成軟骨方向誘導(dǎo)培養(yǎng)28天；通過(guò)對(duì)形成的類軟骨樣組織行甲苯胺藍(lán)染色、阿利新藍(lán)染色、二型膠原免疫組化染色以鑒定其是否形成了軟骨基質(zhì)。通過(guò)Real time PCR評(píng)估鎂合金對(duì)成軟骨

3、分化相關(guān)基因表達(dá)的影響。
　　4.骨形態(tài)發(fā)生蛋白（BMPs）在人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化方面發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。Sclerostin能夠與骨形態(tài)發(fā)生蛋白（BMPs）結(jié)合而抑制BMPs的促成骨作用；該部分研究目的是檢測(cè)Sclerostin對(duì)BMP-2誘導(dǎo)的人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）的細(xì)胞活性以及成骨分化的影響。
　　結(jié)果：
　　1．成功分離和培養(yǎng)了人 BMSCs，三系誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)表明其具有多向分化能力。
　

4、　2．通過(guò)掃描電鏡和激光共聚焦顯微鏡觀察到人 BMSCs在鈣磷涂層鎂合金表面可以很好的粘附，細(xì)胞伸展?fàn)顟B(tài)良好。MTT評(píng)估浸提液發(fā)現(xiàn)涂層鎂合金浸提液對(duì)細(xì)胞活性有促進(jìn)作用，未涂層鎂合金浸提液對(duì)細(xì)胞活性有不利影響。
　　3．人 BMSCs復(fù)合鈣磷涂層鎂合金支架在體外誘導(dǎo)條件下可以形成類軟骨樣組織，經(jīng)過(guò)甲苯胺藍(lán)染色、阿利新藍(lán)染色、二型膠原免疫組化染色證實(shí)軟骨誘導(dǎo)分化成功，并有細(xì)胞外軟骨特異性II型膠原和蛋白聚糖形成。但未涂層多孔鎂合金支架

5、在體外誘導(dǎo)條件下未能形成類軟骨樣組織，可能與其降解產(chǎn)生氫氣阻礙細(xì)胞與材料粘附有關(guān)。Real time PCR結(jié)果發(fā)現(xiàn)鎂合金可以促進(jìn)成collagen II的mRNA表達(dá)，對(duì)Aggreacan、Sox9的mRNA表達(dá)沒(méi)有明顯影響。
　　4.抑制Sclerostin的表達(dá)可以促進(jìn)BMP-2誘導(dǎo)的人BMSCs成骨分化。
　　結(jié)論：
　　人BMSCs復(fù)合鈣磷涂層鎂合金支架在體外誘導(dǎo)條件下可以形成軟骨組織，并能產(chǎn)生軟骨特異性 I