1、目的:
　　探討TGF-β1和BMP-2基因修飾的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）復(fù)合新型仿生支架材料膠原-殼聚糖/膠原-納米羥基磷灰石修復(fù)關(guān)節(jié)軟骨和軟骨下骨損傷的可行性，為組織工程化骨軟骨的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:
　　聯(lián)合應(yīng)用密度梯度離心法及貼壁培養(yǎng)法分離、培養(yǎng)、純化豬BMSCs，應(yīng)用TGF-β1和BMP-2重組慢病毒轉(zhuǎn)染的BMSCs，熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染率；將轉(zhuǎn)染后細(xì)胞分層復(fù)合到膠原-殼聚糖/膠原-納米羥基

2、磷灰石支架（Col-CS/nHAC-PLA）材料上，掃描電子顯微鏡（SEM）檢測支架的孔隙率、孔徑和BMSCs在支架上的粘附生長情況，制作豬股骨髁骨軟骨損傷的動物模型，并應(yīng)用復(fù)合TGF-β1和BMP-2基因修飾的BMSCs的支架進(jìn)行修復(fù)。分別在12W、24W取材，觀察修復(fù)組織的大體情況、蘇木精-伊紅染色、堿性磷酸酶染色、阿爾新藍(lán)過碘酸雪夫染色、Ⅱ型膠原免疫組化染色情況，評價軟骨和軟骨下骨損傷的修復(fù)情況。
　　結(jié)果:
　　1、

3、聯(lián)合應(yīng)用密度梯度離心法和貼壁培養(yǎng)法可以成功分離、培養(yǎng)、純化豬BMSCs，TGF-β1和BMP-2重組慢病毒可成功轉(zhuǎn)染的BMSCs，熒光顯微鏡下觀察到熒光蛋白表達(dá)，間接反映TGF-β1和BMP-2蛋白的表達(dá)。
　　2、Col-CS/nHAC-PLA經(jīng)SEM檢測，其孔隙率都達(dá)到80％左右，CS孔徑約為30-100μm之間，HA孔徑約為50-120μm之間，符合BMSCs生長所需微環(huán)境，SEM還觀察到BMSCs在支架上粘附生長的情況。<

4、br>　　3、成功制作豬膝關(guān)節(jié)骨軟骨損傷動物模型，并應(yīng)用組織工程骨軟骨進(jìn)行修復(fù)。12W時，大體及組織學(xué)觀察示細(xì)胞復(fù)合組新生軟骨較單純材料組厚且表面較平整，新生軟骨和軟骨下骨連續(xù)性好，成骨細(xì)胞胞漿中棕色的堿性磷酸酶顆粒較多，新生軟骨基質(zhì)連續(xù)性好，染成棕色的Ⅱ型膠原明顯。24W時，大體及組織學(xué)觀察示細(xì)胞復(fù)合組較單純材料組新生軟骨完整且較透明，新生軟骨和軟骨下骨連續(xù)性好且排列規(guī)則，成骨細(xì)胞及胞漿中棕色的堿性磷酸酶顆粒多，新生軟骨基質(zhì)連續(xù)性好且