1、真核生物的基因組是以染色質(zhì)的形式存在的，染色質(zhì)結(jié)構(gòu)與基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控活動(dòng)密切相關(guān)。基因轉(zhuǎn)錄前染色質(zhì)結(jié)構(gòu)要發(fā)生一系列的變化，以利于基因轉(zhuǎn)錄的起始和延伸。有兩類復(fù)合物參與了染色質(zhì)結(jié)構(gòu)的修飾和重塑，其中一類是組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶(HATs)和組蛋白去乙?；?HDACs)復(fù)合物，這兩種酶通過對(duì)核心組蛋白進(jìn)行可逆修飾來調(diào)節(jié)核心組蛋白的乙?；剑瑥亩{(diào)控基因的激活或抑制；另一類是依賴ATP的染色質(zhì)重塑復(fù)合物，在核小體內(nèi)以ATP依賴的方式通過改變DNA

2、與組蛋白之間的連接來改變?nèi)旧|(zhì)的結(jié)構(gòu)。 人的染色質(zhì)重塑復(fù)合物(hSWI/SNF)能夠通過引起染色質(zhì)結(jié)構(gòu)的重塑調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄活動(dòng)，進(jìn)而在細(xì)胞的增殖與分化、抗病毒活性及腫瘤抑制等方面起重要作用。INI1/hSNF5/BAF47是hSWI/SNF復(fù)合物的核心亞基，盡管已有很多報(bào)道證明它參與了許多基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控活動(dòng)，但對(duì)其調(diào)控機(jī)制還不十分清楚。 本文旨在證實(shí)INI1/hSNF5/BAF47是否參與了CSF1和c-fos的基因轉(zhuǎn)

3、錄調(diào)控，并對(duì)其分子機(jī)制進(jìn)行初步探討。在HeLa細(xì)胞中，通過瞬時(shí)轉(zhuǎn)染、熒光素酶雙報(bào)告系統(tǒng)檢測(cè)、RT-PCR及RealtimeRT-PCR等實(shí)驗(yàn)方法，研究了INI1/hSNF5/BAF47參與CSF1基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)控活動(dòng)。研究結(jié)果表明，INI1/hSNF5/BAF47的過表達(dá)不僅能夠促進(jìn)CSF1啟動(dòng)子的活性，還能促進(jìn)內(nèi)源CSF1的基因轉(zhuǎn)錄。小分子干涉RNA質(zhì)粒(siINI1)能明顯抑制CSF1基因的啟動(dòng)子活性和內(nèi)源CSF1的基因轉(zhuǎn)錄。并且，I

4、NI1/hSNF5/BAF47結(jié)構(gòu)的完整性是激活CSF1啟動(dòng)子所必需的。這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明，INI1/hSNF5/BAF47在CSF1基因的轉(zhuǎn)錄激活調(diào)控中有一定作用。對(duì)INI1/hSNF5/BAF47上調(diào)CSF1基因轉(zhuǎn)錄可能的機(jī)制進(jìn)行的研究結(jié)果表明，INI1/hSNF5/BAF47對(duì)CSF1的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用需要染色質(zhì)結(jié)構(gòu)及Z-DNA結(jié)構(gòu)的形成。染色質(zhì)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，INI1/hSNF5/BAF47對(duì)CSF1的轉(zhuǎn)錄調(diào)控依賴于在啟動(dòng)子序

5、列的募集作用。 另一方面，在293T細(xì)胞中，通過一系列的共轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)證實(shí)，INI1/hSNF5/BAF47的過表達(dá)抑制了c-fos啟動(dòng)子的活性和內(nèi)源c-fos的基因轉(zhuǎn)錄。小分子干涉RNA質(zhì)粒(siINI1)可以逆轉(zhuǎn)INI1/hSNF5/BAF47對(duì)c-fos基因轉(zhuǎn)錄的抑制作用。而且，INI1/hSNF5/BAF47的兩個(gè)高度重復(fù)結(jié)構(gòu)域(Rpt1andRpt2)與抑制c-fos基因轉(zhuǎn)錄的活性有關(guān)。這些實(shí)驗(yàn)表明，INI1/hSNF5

6、/BAF47在c-fos基因的轉(zhuǎn)錄抑制調(diào)控中有一定作用。在探討INI1/hSNF5/BAF47抑制c-fos基因轉(zhuǎn)錄機(jī)制的研究中發(fā)現(xiàn)，由組蛋白去乙?；感揎椀慕M蛋白去乙?；荌NI1/hSNF5/BAF47介導(dǎo)的c-fos基因轉(zhuǎn)錄抑制作用所必需的。組蛋白去乙?；?(HDAC4)和INI1/hSNF5/BAF47能夠結(jié)合成復(fù)合物，二者的相互作用能夠共同抑制c-fos的基因轉(zhuǎn)錄。染色質(zhì)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，INI1/hSNF5/BAF4

7、7能被募集到c-fos啟動(dòng)子的區(qū)域上降低組蛋白的乙?；?。以上這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明，INI1/hSNF5/BAF47以組蛋白去乙?；敢蕾嚨姆绞揭种屏薱-fos的基因轉(zhuǎn)錄。 綜上所述，本文首次報(bào)道了INI1/hSNF5/BAF47不僅能夠促進(jìn)CSF1的基因轉(zhuǎn)錄，而且還能以組蛋白去乙酰化酶依賴的方式抑制c-fos的基因轉(zhuǎn)錄。本文對(duì)INI1/hSNF5/BAF47作為一個(gè)雙重共調(diào)節(jié)因子參與基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控的分子機(jī)制進(jìn)行了初步研究，為進(jìn)一步了