1、目的：探討紅景天苷(Sal)對(duì)成肌細(xì)胞株C2C12體外分化的影響及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制，為進(jìn)一步開展Sal在體內(nèi)骨骼肌中的作用及機(jī)制研究奠定基礎(chǔ)。
　　方法：研究1：Sal對(duì)成肌細(xì)胞體外分化的影響。1.1：在成肌細(xì)胞株C2C12中加入不同濃度 Sal誘導(dǎo)成肌分化過程中，用相差顯微鏡觀察不同濃度 Sal對(duì)C2C12分化過程中匯聚、融合和形成多核肌管的影響。1.2：免疫熒光組化分析Sal對(duì)C2C12成肌分化融合率的影響。1.3：real-ti

2、me PCR和WB檢測Sal對(duì)C2C12成肌分化特異基因和蛋白表達(dá)的影響。研究2：Sal影響成肌細(xì)胞體外分化的機(jī)制研究。2.1：WB檢測Sal處理對(duì)C2C12成肌分化中TGF-β/Smad通路的影響。2.2：WB、real-time PCR和免疫熒光組化檢測Smad3磷酸化抑制劑SIS3對(duì)Sal處理引起的C2C12成肌分化特異蛋白和基因的影響及TGF-β/Smad通路的變化。2.3：實(shí)驗(yàn)方法同2.2檢測Myf5抑制對(duì)Sal處理引起的C2

3、C12成肌分化特異蛋白和基因的影響，應(yīng)用ChIP和雙熒光素酶檢測Smad3和Myf5間關(guān)系。
　　結(jié)果：（1）Sal顯著抑制C2C12成肌分化。50ug Sal處理：A.免疫熒光結(jié)果表明Myosin-neonatal陽性面積和myogenin陽性核均顯著減少,顯著抑制C2C12分化過程中肌管形成；B.real-time PCR和WB結(jié)果表明，MyoD和myogenin基因及蛋白表達(dá)水平均顯著下降,顯著抑制C2C12分化過程中細(xì)胞的

4、融合和肌管的形成；（2）Sal通過激活Smad3磷酸化來上調(diào)Myf5進(jìn)而抑制C2C12成肌分化。A.WB結(jié)果表明Sal顯著抑制C2C12分化效應(yīng)伴有Smad2/Smad3磷酸化增加，尤其是Smad3；B.SIS3處理可顯著逆轉(zhuǎn)Sal誘導(dǎo)的Smad3磷酸化水平增加和成肌抑制；C.Myf5抑制顯著逆轉(zhuǎn)Sal誘導(dǎo)的成肌抑制且Smad3對(duì)Myf5的激活具有調(diào)控作用。
　　結(jié)論：Sal通過誘導(dǎo)成肌細(xì)胞株C2C12分化過程中TGF-β/Sma