1、AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterCharacterizingthebindingpropertiesofAP3D1EardomainusingYeastTwo—hybridscreeningofarandompeptidelibraryBvChengqianZhang√一一一Supervisor：ProfJintaoZhangAssociateProfEl

2、iSongBiologicalEngineering一一一BiologicalEngineeringDepartmentMay2013摘要摘要細胞內的膜轉運系統(tǒng)牽涉到多個層次的調控過程，包括貨物分選、膜泡形成、膜泡運輸及融合等。銜接蛋白Adaptin(AP)復合物是膜轉運系統(tǒng)中的一種關鍵調控因子，可以識別目標蛋白并把其分選到運輸膜泡內作為貨物進行輸送。現已發(fā)現五種銜接蛋白復合物(APlAP5)，其中AP3(adaptorproteinc

3、omplex3)主要參與從高爾基體／內體到溶酶體的轉運工作。AP3由四個蛋白亞基組成，其中AP3D1的C末端含有一個非常保守的Ear結構域，它可以識別結合多種輔助蛋白形成運輸膜泡，但目前該結構域的分子識別機制及由其所介導的生物學調控功能還不清楚。蛋白質是生命現象的物質基礎，而蛋白蛋白之間的相互作用在生命活動中發(fā)揮著極其重要的作用，因此對它的研究可以了解蛋白質在生物體中的作用方式，從而揭示它在生物體內行使的功能。為了能夠只通過一次篩選就可

4、以找出Ear結構域的所有配體蛋白，在本論文中，我們利用酵母雙雜交技術篩選隨機多肽文庫的方法，首先找出Ear結構域的結合多肽，然后通過生物信息學分析找出其結合規(guī)律并在蛋白質組水平上預測其所有的潛在結合蛋白，最后再通過實驗驗證新的配體蛋白。在眾多的研究方法中，酵母雙雜交系統(tǒng)不僅可以研究活細胞體內的蛋白質相互作用、靈敏度高，而且不需對目的蛋白進行純化，使實驗操作簡單易行，因此是研究蛋白質相互作用的一種強有力的方法。另外，我們篩選隨機多肽文庫，