1、人類基因組全序列測定的完成,標志著一個嶄新的時代-后基因組時代的來臨.生命科學從大規(guī)模的基因組序列分析轉向對基因功能的研究,蛋白質組學研究已成為21世紀生命科學的熱點領域.開展大規(guī)模蛋白質組研究的必備條件是高分辨蛋白質分離技術和高通量、高靈敏度的鑒定技術.因此在該研究的第一部分首先優(yōu)化了堿性蛋白質和超放大窄范圍膠(Zoom gel)的二維電泳(2-DE)分離條件,并利用優(yōu)化后的參數(shù),建立高分辨胎肝全蛋白2-DE表達譜,分辨蛋白質點達到5

2、487個.隨后,探索了膠內蛋白質鑒定的策略,建立了基于2-DE的高通量膠上蛋白質點鑒定技術.同樣,在該研究的第二部分優(yōu)化了一維凝膠電泳和液相色譜串聯(lián)質譜聯(lián)合的復雜蛋白質混合物鑒定技術.利用上述建立的蛋白質組學研究技術體系,開展人胎肝蛋白質組表達譜研究.4-6月孕齡的人胎肝除具備正常肝生理功能外,還是胚內至關重要的造血器官,造血、免疫系統(tǒng)干祖細胞的主要來源.大規(guī)模的胎肝蛋白質組分析,將很有可能發(fā)掘與增殖、造血與發(fā)育相關的功能蛋白質.利用亞

3、細胞蛋白質組技術、三種基于凝膠電泳的分離模式和多種質譜鑒定方法相結合,共計鑒定非冗余人胎肝蛋白質1045個,其中902個為功能己知的蛋白質,143個為首次從胎肝中發(fā)現(xiàn)的新蛋白.在此基礎上,對己鑒定的蛋白質進行了系統(tǒng)地功能分類和相對豐度分析,并與9個其它相關蛋白質組表達譜數(shù)據進行了比較分析,獲得了一批與正常肝、肝癌、造血和發(fā)育時期相關的蛋白質.腫瘤蛋白標志物的發(fā)掘是蛋白質組學的一個重要應用.在論文的第二部分,開展了肺癌細胞無血清培養(yǎng)分泌蛋

4、白質組研究.共收集4對配對和一個腫瘤標本的無血清培養(yǎng)上清,全部采用SDS-PAGE和串聯(lián)質譜鑒定,對配對樣品進行差異蛋白質組分析,共鑒定非冗余分泌蛋白質238個.與己知血清蛋白庫、全尿蛋白庫進行同源比對分析表明,有153個蛋白質是首次從分泌蛋白體系中檢出.9個用臨床ELISA檢測的蛋白質,無一例外地從人血清中檢出,大部分蛋白質的差異表達模式與質譜結果相符,可用于指導進一步的臨床腫瘤相關標志物篩選.總之,通過該研究,首先建立了大規(guī)模的人胎