1、肺癌是當今世界常見惡性腫瘤之一，已成為絕大多數(shù)國家癌癥死亡的首要原因。肺癌的發(fā)病機制仍不清楚，而其發(fā)病率和死亡率呈逐年上升的趨勢，如何做到早期發(fā)現(xiàn)肺癌成為防治的關(guān)鍵。蛋白質(zhì)組學研究方法和技術(shù)為肺癌的早期診斷和防治的研究提供了有利條件。 [目的]利用蛋白質(zhì)組學方法，建立分辨率高和重復性好的人肺腺癌及其正常人血清蛋白質(zhì)的雙向凝膠電泳圖譜，并識別鑒定其差異表達的蛋白質(zhì)，從而尋找肺腺癌早期特異性的診斷指標。 [方法](1)收集8

2、例肺腺癌患者血清及4例正常人血清，于-80℃冰箱保存。用SwellGel(R)Blue白蛋白去除試劑盒過濾血清，并用Bradford法測定其濾液總蛋白濃度，然后分裝凍存用于分析。 (2)應(yīng)用固相IPG梯度雙向凝膠電泳分離肺腺癌患者及正常人血清總蛋白，凝膠經(jīng)銀染或考馬斯亮藍(Coomnassieblue)染色顯色后，用Gs-800光密度儀獲得凝膠圖像。經(jīng)PDQuest凝膠圖像分析軟件進行分析后，找出有差異的蛋白點。 (3)

3、將部分差異的蛋白點從凝膠上挖下，胰蛋白酶進行膠內(nèi)原位酶解，經(jīng)Voyager-DETMPROMALDI-TOF-MS儀分析獲得肽質(zhì)量指紋圖，然后利用Mascot查詢軟件搜尋數(shù)據(jù)庫鑒定蛋白質(zhì)。 [結(jié)果](1)獲得了重復性較好的雙向電泳銀染圖譜。圖像分析檢測發(fā)現(xiàn)2塊膠斑點匹配率達78％，在IEF方向的平均偏差為(1.82±0.66)mm，SDS-PAGE方向的平均偏差為(2.24±0.63)mm。 (2)肺腺癌患者血清與正常健

4、康個體血清的雙向電泳圖譜經(jīng)PDQuest7.1軟件匹配分析，共篩選出24個差異的蛋白點，其中Spot1～8在肺腺癌患者的血清中高表達；Spot9,10,11,12號蛋白點僅出現(xiàn)在肺腺癌患者的血清中；Spot13～22號蛋白點在肺腺癌患者的血清中低表達；Spot23,24號蛋白點僅出現(xiàn)在正常人的血清中。 (3)從24個差異的蛋白點中選出7個蛋白點，經(jīng)膠內(nèi)原位酶解-質(zhì)譜指紋圖分析，獲得了7張肽質(zhì)量指紋圖譜，經(jīng)數(shù)據(jù)庫查詢分析，成功的鑒