1、桔小實蠅Bactroceradorsalis(Hendel)隸屬于雙翅目Diptera，實蠅科Tephritidae，是一種危險的農(nóng)業(yè)害蟲。因其世代歷期短、繁殖力強、加之殺蟲劑的不合理使用，桔小實蠅已對多種殺蟲劑產(chǎn)生了抗性。目前，有關桔小實蠅的抗性監(jiān)測、機理和治理的研究日益增多，研究焦點集中于桔小實蠅解毒酶(P450s、GSTs和CarEs等)的生化毒理學及靶標(如AChR)的分子生物學特性等方面，而對其他昆蟲中研究非常多的γ-氨基丁酸

2、受體(GABA)及相關酶的生化及分子毒理學特性還鮮有報道。
　　 本研究以桔小實蠅為研究對象，探討GABA受體及相關酶在抗藥劑脅迫中的作用。采用局部點滴法測定了桔小實蠅福州種群對阿維菌素的敏感性;在此基礎上，采用酶標板滴定法測定了阿維菌素處理前后，桔小實蠅體內谷氨酸脫羧酶(GAD)和γ-氨基丁酸轉氨酶(GABA-T)的比活力變化;此外，基于轉錄組數(shù)據(jù)及RACE技術，開展了GABA受體相關基因的全長序列克隆，并對所得基因響應阿維菌

3、素刺激的表達模式進行了解析。論文從生理生化和分子生物學角度分析了桔小實蠅GABA相關酶和基因的毒理學特性。獲得的主要結果如下:
　　 1、桔小實蠅對阿維菌素的敏感性測定
　　 采用局部點滴法測定了桔小實蠅福州種群對阿維菌素的敏感性，并與東莞、廣州、海口和昆明等4個地理種群的生測結果進行了比較分析。24h生測結果表明，桔小實蠅昆明種群對阿維菌素最敏感，福州種群次之，東莞種群最不敏感。與桔小實蠅東莞、廣州和海口種群相比，昆明

4、和福州2個種群對阿維菌素敏感性差異均達到顯著水平。根據(jù)阿維菌素的作用特點，測定了72h的敏感性，LD50僅0.475ng/fly。
　　 2、桔小實蠅GABA相關酶的生化毒理學特性研究
　　 2.1、GABA含量測定
　　 采用HPLC法測定了阿維菌素處理前后桔小實蠅的GABA含量。結果表明，經(jīng)阿維菌素LD10的劑量處理24h后，桔小實蠅GABA含量升高，但差異不顯著（1.13倍，P＞0.05）;而經(jīng)LD50的劑

5、量處理24h后，GABA含量顯著升高(1.34倍，P＜0.05)。初步推測桔小實蠅通過保持高含量的GABA來應對阿維菌素的脅迫。
　　 2.2、GABA-T和GAD比活力測定
　　 采用微量滴度酶標板法測定了桔小實蠅與GABA含量相關的GABA-T和GAD比活力。結果顯示，經(jīng)過阿維菌素不同劑量(LD10和LD50)處理后，GABA-T比活力無顯著性變化，而GAD的比活力與阿維菌素的處理劑量和處理時間成正相關。表明GABA

6、含量升高是GAD比活力增強的結果。
　　 3、桔小實蠅GABA相關酶的分子生物學特性研究
　　 3.1、GABA受體相關基因的克隆
　　 基于轉錄組測序，結合RT-PCR和RACE技術，從桔小實蠅體內克隆獲得GABA受體相關的2個基因cDNA全長和3個基因的片段序列。上述基因提交至GenBank后的名稱和登錄號分別為BdGAP(JQ796071.1)、BdGD1(KC763804)和BdGAF(KC763801)

7、、BdGBR(KC763802)、BdSCD(KC763803)。應用Protparam、Scanprosite等生物信息學軟件分析了預測蛋白質的理化性質。此外，采用軟件MEGA5.0最大似然法(Maximum-likelihoodmethod，ML)構建了桔小實蠅上述5個GABA受體相關基因的系統(tǒng)發(fā)育樹，結果顯示它們和其它雙翅目昆蟲的親緣關系非常近。
　　 3.2、GABA受體相關基因的表達模式解析
　　 以桔小實蠅α

8、-Tubulin作為內參基因，采用qPCR技術測定了BdGAF、BdGBR、BdSCD和BdGD1在不同發(fā)育階段（卵、幼蟲、蛹和成蟲）、不同體段（頭、胸和腹）以及阿維菌素處理前后的mRNA表達模式。檢測結果表明，桔小實蠅GAF基因在卵期表達量最高，GBR、GD1基因在幼蟲期表達量最高，而SCD基因在成蟲的表達量最高;不同體段的測定結果表明，GBR、SCD在頭部表達量顯著高于胸部和腹部，GAF基因在各體段表達量基本一致，而GD1基因在腹部

9、表達量最高;阿維菌素處理前后的表達量測定結果顯示，以LD50的劑量處理不同時間后，SCD基因的表達量變化在1-2倍之間;GAF、GBR和GD1基因在處理后表達量顯著上升，且隨著處理時間延長而升高;經(jīng)不同劑量的阿維菌素處理24h后，桔小實蠅GAF、GBR和SCD基因表達量較對照均有顯著上升，且隨著劑量增加而升高，而GD1的表達量在亞致死劑量LD10處理后上升，在致死中量LD50處理后較對照卻下降。
　　 研究從生理生化和分子生物學