1、脊髓損傷是一種合并全身感覺、運動功能障礙等后遺癥的嚴(yán)重?fù)p傷。隨著現(xiàn)代社會交通和建筑業(yè)的發(fā)展，該病發(fā)病率也不斷升高。嚴(yán)重的神經(jīng)功能障礙后遺癥導(dǎo)致患者正常生活難以自理，在精神及經(jīng)濟上給家庭和社會造成了損失。當(dāng)前醫(yī)療手段對脊髓損傷后神經(jīng)功能的恢復(fù)尚沒有較理想的效果。膠質(zhì)瘢痕是影響脊髓損傷后神經(jīng)軸突再生和功能恢復(fù)的重要因素。目前常見的抑制膠質(zhì)瘢痕形成的方法有:抑制SCI后星形膠質(zhì)細(xì)胞分裂增殖;采用藥物裂解CSPG;抑制CSPG表達(dá);基因技術(shù)封閉

2、GFAP、Vim表達(dá);X線放射治療抑制膠質(zhì)瘢痕;抑制SCI后炎癥反應(yīng);手術(shù)切除膠質(zhì)瘢痕等。轉(zhuǎn)錄因子Nrf2在多種疾病模型中可抑制炎癥反應(yīng)，如自身免疫疾病、哮喘、肺氣腫、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、結(jié)腸炎、動脈粥樣硬化等。NF-κb是調(diào)控炎癥反應(yīng)的主要轉(zhuǎn)錄因子。Nrf2主要通過抑制NF-κb活性，降低各種前炎癥介質(zhì)如基質(zhì)金屬蛋白酶、炎癥趨化因子、細(xì)胞粘附分子等表達(dá)發(fā)揮抗炎作用。Nrf2在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中也有明顯的神經(jīng)保護作用，其激活后可在神經(jīng)退行性疾病、

3、腦缺血梗死、腦出血、顱腦創(chuàng)傷等疾病中發(fā)揮神經(jīng)保護作用。因此我們推測，Nrf2可能通過調(diào)控NF-κb信號通路抑制SCI后炎癥反應(yīng)而抑制膠質(zhì)瘢痕形成，為此我們設(shè)計了本實驗研究。
　　目的:
　　在實驗中，我們選用ICR小鼠(Nrf2+/+、Nrf2-/-)，建立小鼠脊髓損傷模型，通過采用Nrf2激活劑SFN和基因敲除對Nrf2進(jìn)行正反向調(diào)控，觀測Nrf2在SCI中對NF-κb信號通路、膠質(zhì)瘢痕形成、神經(jīng)功能恢復(fù)的影響，探討Nrf

4、2對SCI后膠質(zhì)瘢痕形成的影響及作用機制。
　　方法:
　　選用ICR小鼠(Nrf2+/+、Nrf2-/-)，建立小鼠脊髓損傷模型，給予Nrf2激活劑SFN干預(yù)，給藥方法:將SFN以玉米油稀釋，建模后即給藥，腹腔注射，5mg/kg/d，共累計7次給藥，溶劑對照組等體積玉米油腹腔注射。設(shè)計6個實驗分組，分別為野生型假手術(shù)組、野生型單純損傷組、野生型溶劑干預(yù)組（等體積玉米油腹腔注射）、野生型 SFN干預(yù)組(5mg/kg/d，腹腔

5、注射)、Nrf2敲除假手術(shù)組、Nrf2敲除損傷組。術(shù)后1d、7d、14 d、21 d、28 d對各組小鼠進(jìn)行BMS評分;術(shù)后7d行免疫熒光雙標(biāo)染色(GFAP+Nrf2、GFAP+Vim、GFAP+P65、GFAP+CSPG)觀察脊髓組織病理變化;術(shù)后7d WB檢測各組Nrf2、P65、p-Iκ Bα、GFAP、Vim、CSPG蛋白表達(dá)情況，ELISA檢測TNF-α、IL-1β蛋白表達(dá)情況，Real-time PCR檢測TNF-α、IL-

6、1β mRNA相對含量;術(shù)后28d WB檢測GFAP、CSPG、GAP-43蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果:
　　行為學(xué):假手術(shù)組BMS評分均為9分，各脊髓損傷組術(shù)后后肢運動功能均有不同程度恢復(fù)，術(shù)后28d時單純損傷組評分為2.17±0.41分，玉米油組2.33±0.52分，SFN組3.33±0.52分，Nrf2敲除損傷組1.50±0.54分，SFN組功能恢復(fù)情況最好，玉米油組與單純損傷組次之，而Nrf2敲除損傷組恢復(fù)情況最差，玉

7、米油組與單純損傷組之間無顯著差異，其余各組之間比較差異明顯(P＜0.05)。
　　免疫熒光染色:術(shù)后7d，SFN組與單純損傷組相比，Nrf2核移位增加，P65核移位減少，同時星形膠質(zhì)細(xì)胞活化水平降低，GFAP、Vim、CSPG染色較弱;Nrf2敲除損傷組與單純損傷組相比，Nrf2染色不明顯，P65核移位增加，星形膠質(zhì)細(xì)胞活化水平明顯增強，GFAP、Vim、CSPG染色增強;單純損傷組與玉米油組無明顯差異。
　　WB檢測相關(guān)蛋

8、白表達(dá)情況:術(shù)后7d，SFN組與單純損傷組相比，Nrf2（核蛋白）表達(dá)增加，P65(核蛋白)降低，p-IκBα、GFAP、Vim、CSPG降低;Nrf2敲除損傷組與單純損傷組相比，P65(核蛋白)增加，p-IκBα、GFAP、Vim、CSPG增加;術(shù)后28d，SFN組與單純損傷組相比，GFAP、CSPG降低，GAP-43增加，Nrf2敲除損傷組與單純損傷組相比，GFAP、CSPG增加，GAP-43降低;單純損傷組與玉米油組無明顯差異。<

9、br>　　ELISA檢測TNF-α、IL-1β蛋白表達(dá)情況:術(shù)后7d，SFN組與單純損傷組相比，TNF-α、IL-1β蛋白表達(dá)降低，Nrf2敲除損傷組與單純損傷組相比，TNF-α、IL-1β蛋白表達(dá)增加;單純損傷組與玉米油組無明顯差異。
　　RT-PCR檢測TNF-α、IL-1β mRNA相對含量:術(shù)后7d，SFN組與單純損傷組相比， TNF-α、IL-1β mRNA表達(dá)降低，Nrf2敲除損傷組與單純損傷組相比，TNF-α、IL-