1、大豆是一種富含優(yōu)質蛋白、無膽固醇油脂、多種糖類碳水化合物和微量物質的雜糧作物，是飼料、油料和蛋白質的重要來源，也是用地、養(yǎng)地和保持生態(tài)平衡的重要作物。本研究以大豆為中心，在大豆上開展病毒病快速檢測技術的研究和植物病毒表達載體的構建以用于大豆病害的防預和基因功能的研究。
　　BPMV的RT-LAMP檢測:菜豆莢斑駁病毒(Beanpodmottlevirus，BPMV)是一種廣泛分布于大豆產(chǎn)區(qū)且易造成經(jīng)濟損失的災害性病毒，在我國被列為

2、檢疫性病毒。本研究將RT-LAMP技術和RNA快速抽提法相結合，建立一種用于檢測大豆種子中BPMV的一步法RT-LAMP檢測技術。該技術包括所設計的引物和優(yōu)化過的反應體系。經(jīng)過測試，該技術能夠在大豆種子中快速、特異、準確地檢測出BPMV且無交叉反應;其最適工作溫度為62.5-65℃;可工作模板劑量范圍為0.2-1.8μL/10μL;靈敏度為BPMVRT-PCR的1000倍。因此，該技術可以作為BPMV檢驗檢疫以及預防BPMV大規(guī)模爆發(fā)的

3、有效工具。
　　SMV表達載體的構建:盡管已有一些不同株系的大豆花葉病毒(Soybeanmosaicvirus，SMV)表達載體被報道，但是這些SMV的基因組全長都是9585bp左右，目前還沒有基因組全長為9994bp左右的重組型SMV被構建成表達載體。這種重組型SMV是2011年在南京被鑒定，其基因組5'端與菜豆普通花葉病毒(Beancommonmosaicvirus，BCMV)的5'端發(fā)生過重組，因此在5'端與普通SMV的5'

4、端有較大的差異，而在3'端差異較小。本研究將重組型SMV的5'端與普通SMV的3'端進行拼接，構建出一個嵌合式重組型SMV表達載體。并在該SMV的P1和HcPro間插入β-葡萄糖醛酸酶基因(GUS)，通過質粒摩擦接種大豆30天后，在接種大豆的系統(tǒng)葉上特異地檢測到GUS染色，同時通過農(nóng)桿菌介導的方式注射本氏煙，在接種本氏煙的系統(tǒng)葉上也特異地檢測到GUS染色。因此，本研究中所構建的嵌合式重組型SMV表達載體可以作為基因功能研究工具在大豆、本