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文檔簡介
1、選取大豆品種冀豆7號與大豆花葉病毒株系N3組成抗病組合(亦稱不親和組合),冀豆7號與大豆花葉病毒株系SC-8組成感病組合(亦稱親和組合),運用摩擦接種和點接種技術(shù)接種病毒,在接種后不同時間對接種葉片和模擬接種對照葉片進行苯胺藍染色(胼胝質(zhì)特異染料)和DAF-FMDA(對NO標記的特異熒光分子探針)孵育,對互作過程中大豆葉片的胼胝質(zhì)和NO產(chǎn)生情況進行標記,結(jié)合熒光顯微鏡及激光共聚焦熒光顯微鏡觀察,并通過藥物學試驗對NO在大豆抗花葉病毒侵染
2、過程中的作用進行了初步探討。主要試驗結(jié)果如下:
1、不親和組合在接種后2h就產(chǎn)生了較弱的NO熒光,且隨接種時間的延長其NO熒光逐漸增強,NO的熒光面積也在不斷擴大,但始終被限制在壞死斑內(nèi)部及其周邊;而親和組合中只在接種后早期(2-24h)觀察到極微弱的NO熒光,之后各時間點(48-264h)均未能觀察到NO熒光。
2、不親和組合中NR(硝酸還原酶)和NOS(一氧化氮合酶)兩種酶的活性變化趨勢表現(xiàn)類似,即自接種后2-1
3、20小時呈現(xiàn)快速上升趨勢,之后保持較高的平穩(wěn)狀態(tài),在后期即接種后240h或264h兩種酶活性又呈現(xiàn)急劇下降趨勢;而在親和組合中,兩種酶活性的變化不明顯且與模擬接種對照相近。
3、預(yù)注射c-PTIO能夠清除病毒侵染早期誘發(fā)的NO;預(yù)注射NR抑制劑或NOS抑制劑均可使病毒侵染早期誘發(fā)的NO產(chǎn)生量減少。對不親和互作過程中胼胝質(zhì)的熒光觀察發(fā)現(xiàn),無論清除或減弱互作早期的NO,均使得胼胝質(zhì)的形成推遲,從而導(dǎo)致病毒能夠進行系統(tǒng)侵染,在未接種
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