1、由Didymella bryoniae引起的西瓜和甜瓜蔓枯病是最重要的一種世界性的西瓜和甜瓜土傳病害之一。近年來，西瓜和甜瓜蔓枯病在各個產區(qū)普遍發(fā)生，致使西瓜和甜瓜產量損失嚴重。蔓枯病可由局部的感染源開始向周邊蔓延傳染，形成大面積的病害發(fā)生，因此需快速有效地檢測該病害以及時控制病害流行程度。此外，西瓜和甜瓜種子以及帶菌的瓜地前茬土壤都是蔓枯病發(fā)生的主要初侵染源，對西瓜和甜瓜種子以及帶菌的瓜地前茬土壤做好蔓枯病菌的檢測工作，對防治該病害有

2、著重要意義。
　　 本研究中，利用西瓜和甜瓜蔓枯病特異性PCR和real-time PCR引物，對接菌后的西瓜植株、接菌后的土壤以及西瓜和甜瓜種子做了分子檢測研究，主要取得了以下結果:
　　 1.篩選出了蔓枯病菌和枯萎病菌的特異性檢測引物，并確定了引物的檢測靈敏度以及構建了real-time PCR的檢測標準曲線。結果表明，文獻查閱得到的引物DB-1F/R、DB-3F/R1、DB-3F/R2對供試菌XD、TG均有較高的靈

3、敏性，最低可檢測到濃度為1pg/μl的樣品DNA;本論文設計得到的引物DB-3F/DBRT-3R-1能檢測到10pg/μl的XD樣品DNA，DB-1F/DBRT-1R-1能檢測到10pg/μl的TG樣品DNA。引物FnSc-1/FnSc-2和引物Fon-1/Fon-2對供試菌RACE1基因組DNA的最低檢測濃度分別為10pg/μl和1ng/μl。同時建立了部分引物的real-time PCR標準曲線，其中引物DB-1F/R對病菌XD和T

4、G的最低檢測濃度皆為0.1pg/μl，引物DB-3F/DBRT-3R-1對病菌XD、引物DB-1F/DBRT-1R-1對病菌TG的最低檢測濃度皆為1pg/μl，鐮孢屬引物FnSc-1/2和枯萎病菌引物Fon-1/2對枯萎病菌RACE1的最低檢測濃度分別為1pg/μl和10pg/μl。
　　 2.利用引物DB-1F/R，通過PCR和real-timePCR技術能夠檢測接種蔓枯病菌XD的西瓜苗，通過PCR技術能夠檢測接種蔓枯病菌XD

5、和TG孢子的土壤進行PCR檢測。結果表明，兩種檢測方法都能在出現(xiàn)病狀前檢測到植株帶菌，并且real-time PCR檢測較PCR檢測靈敏，能較早地檢測到植株中帶菌。對于兩種病菌最低都能檢測到4×102個孢子/克土壤。
　　 3.利用蔓枯病菌引物DB-1F/R、鐮孢屬引物FnSc-1/2和西瓜枯萎病菌引物Fon-1/2，能夠檢測市面上所售西瓜和甜瓜各品種種子是否帶菌。結果表明，PCR和real-time PCR技術都檢測到西瓜品種