1、棉花黃萎病(cotton verticillium wilt)主要是由大麗輪枝菌（Verticillium dahliae）侵染引起的，是一種嚴重危害棉花生產(chǎn)的世界性土傳真菌病害。該病菌可以在土壤中存活多年，成為翌年棉花病害的重要侵染源。因此，快速及時地檢測出棉花黃萎病菌，對棉花黃萎病的早期監(jiān)控預警及后期防治具有重要意義。
　　土壤是棉花黃萎病菌生存的主要場所，但是由于土壤中存在著種類繁多且不計其數(shù)的微生物，從土壤中直接分離得到病

2、原菌十分困難;另一方面，由于土壤中腐植物質(zhì)等抑制因子的存在，直接從土壤中提取病原菌DNA也比較困難。本研究改進了土壤中棉花黃萎病菌的DNA提取方法，并運用巢氏PCR技術(shù)，建立了土壤中棉花黃萎病菌的快速分子檢測體系，具有高度的特異性和靈敏性，為建立基于微流控PCR技術(shù)的棉花黃萎病的快速檢測技術(shù)奠定基礎(chǔ)。
　　論文主要研究結(jié)果如下:
　　1、設(shè)計了棉花黃萎病菌的特異性引物VDS-F/VDS-R，通過反應(yīng)條件優(yōu)化，建立了棉花黃萎病

3、菌的常規(guī)PCR檢測體系，特異性擴增產(chǎn)物大小約520bp，檢測靈敏度達到10pg級。該體系檢測特異性強，可以準確檢測棉花黃萎病菌的三種不同菌株ⅥD、V991、V250，還可以特異性地從含有棉花黃萎病菌的土壤及棉花植株組織中檢測到病原菌。
　　2、分析比較了5種土壤基因組的提取方法，建立了液氮研磨-試劑盒方法提取土壤棉花黃萎病菌DNA的標準程序。利用此方法提取的土壤棉花黃萎病菌基因組DNA質(zhì)量較高，可以滿足后續(xù)PCR擴增的要求。

4、>　　3、建立了土壤中檢測棉花黃萎病菌的巢氏PCR檢測技術(shù)。巢氏PCR第一輪引物為ITS1/ITS4，第二輪引物為VDS-F/VDS-R。利用改進的土壤提取方法提取帶菌土壤的總DNA，該巢氏PCR檢測體系可以準確地檢測出土壤中的棉花黃萎病菌，檢測的靈敏度達到10個孢子/克土。本研究建立的土壤中棉花黃萎病菌的巢氏PCR檢測方法可為生產(chǎn)應(yīng)用中棉花黃萎病的病害風險評估提供技術(shù)支持。同時，該方法的建立，為基于微流控PCR技術(shù)的棉花黃萎病菌快速檢