細胞色素P450的原核表達及應(yīng)用于內(nèi)分泌干擾物雙酚A的檢測.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、細胞色素P450是包含一個血紅素蛋白的超大家族,它被發(fā)現(xiàn)存在于所有的生物有機體中:從細菌、酵母、真菌、植物、動物以至于人體,這個酶引人注目的特點是能夠催化廣泛的有機化合物的反應(yīng),能使有害物質(zhì)轉(zhuǎn)變成為可溶物從體內(nèi)排出。因此它在各種生物合成和生物降解中起著重要的作用。
   本論文對人細胞色素P4501A2、P4502C9、P4502C19、P4502D6、P4503A4五種人細胞色素P450和NADPH-細胞色素P450還原酶的在

2、大腸桿菌中共表達,表達的蛋白質(zhì)進行了初步的分離,獲得膜蛋白,P450表達水平每升細胞培養(yǎng)物從3.8到38.7 nmol不盡相同,而還原酶的表達水平每升細胞培養(yǎng)物從8.37到33.9 U大小不等,并以雙酚A為底物研究了它們的酶活性。
   利用原核表達獲得CYP2C9和NADPH-細胞色素P450還原酶,利用聚丙烯酰胺固定CYP2C9酶于熱裂解石墨電極表面,構(gòu)建相應(yīng)的生物傳感器,實現(xiàn)了CYP2C9的直接電化學(xué),并且研究了CYP2C

3、9的直接電化學(xué)行為,進一步應(yīng)用于其相應(yīng)底物雙酚A的催化氧化研究和分析檢測。
   制備一種納米羥基磷灰石修飾碳糊電極(Nano-HAP-CPE),并建立了一種靈敏、簡便的檢測雙酚 A的電化學(xué)分析方法。通過循環(huán)伏安法(CV)、計時庫侖法(CC)、線性性掃描法 (LSV)和差分脈沖伏安法(DPV)等方法研究了BPA在Nano-HAP-CPE電極上的電化學(xué)行為,得到電化學(xué)動力學(xué)參數(shù)并優(yōu)化檢測條件。結(jié)果表明:Nano-HAP-CPE電極

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