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文檔簡(jiǎn)介
1、中華絨螯蟹(Eriocheir sinensis),是我國(guó)重要的經(jīng)濟(jì)蟹類之一。為了研究組蛋白H1在中華絨螯蟹非濃縮核形成中的作用及在其精子發(fā)生過(guò)程中的動(dòng)態(tài)變化,本文采用PCR和RACE技術(shù)獲得了中華絨螯蟹組蛋白H1基因的全長(zhǎng)cDNA序列。通過(guò)生物信息學(xué)方法對(duì)該基因進(jìn)行了分析,其中包括:組蛋白H1的氨基酸分析,三級(jí)結(jié)構(gòu)分析和比較,同源性分析,系統(tǒng)樹分析和基因組結(jié)構(gòu)特征分析。同時(shí)采用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)分析了組蛋白H1及H1-delta在中華
2、絨螯蟹精巢發(fā)育不同時(shí)期的表達(dá)特征。
本研究表明:中華絨螯蟹組蛋白H1基因的全長(zhǎng)cDNA序列為804bp,包括79 bp的5′非編碼區(qū)(5′UTR)、185 bp的3′非編碼區(qū)(3′UTR)和540bp的開放閱讀框(ORF),共編碼179個(gè)氨基酸,所編碼多肽的相對(duì)分子量為18.28 kDa,理論等電點(diǎn)pI為10.93。此研究首次成功確定、克隆并測(cè)序了中華絨螯蟹H1基因的全長(zhǎng)cDNA序列。對(duì)比中華絨螯蟹、家鼠和鯽魚的H1結(jié)構(gòu)域的三
3、級(jí)結(jié)構(gòu),證明H1的結(jié)構(gòu)域在進(jìn)化上是保守的。氨基酸序列同源性分析發(fā)現(xiàn),組蛋白H1在同一屬間的保守性很高(90%以上),但在不同屬間的保守性卻較低(50%左右),尤其是C末端結(jié)構(gòu)差異很大。實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)的結(jié)果顯示,H1及H1-delta在中華絨螯蟹精巢不同發(fā)育期均具有表達(dá),且表達(dá)量均在精母細(xì)胞時(shí)期達(dá)到最大,之后逐漸下降,到精子期時(shí)下降至最低。H1在精原細(xì)胞期、精母細(xì)胞期、精細(xì)胞期的表達(dá)量與精子期相比均呈現(xiàn)出顯著差異(P<0.05),而H
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