興凱湖翹嘴鲌(Culter alburnus)H-FABP與LPL基因的克隆及表達.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、翹嘴鲌(Culter alburnus)是中國名貴的鯉科(Cyprinidae)淡水魚類,具有很高的經(jīng)濟價值。但由于過度捕撈,導致天然資源日益減少,其市場需求日趨緊張,因此,翹嘴鲌具有良好人工養(yǎng)殖前景。魚類的肉質(zhì)風味、口感等是影響其受消費者歡迎程度的重要因素。目前,從分子水平對魚類肉質(zhì)進行的研究越來越多,許多魚類肉質(zhì)性狀候選基因被逐漸發(fā)掘出來,其中脂蛋白酯酶(idella lipoprotein lipase,LPL)和脂肪酸結(jié)合蛋白家

2、族(fatty acid binding proteins,F(xiàn)ABPs)已被廣泛研究。
   本研究根據(jù)Genbank中已知的鯉科魚類LPL和H-FABP基因序列設(shè)計引物,采用RT-PCR和RACE技術(shù)克隆出翹嘴鲌脂蛋白酯酶(idella lipoprotein lipase,LPL)和心型脂肪酸結(jié)合蛋白(Heart FABP)的部分cDNA序列,再利用獲得的序列設(shè)計引物擴增出其他部分的cDNA序列,將所得序列進行拼接,得到全序

3、列;采用熒光定量PCR(Real-time PCR)技術(shù)檢測了兩者在興凱湖翹嘴鲌心臟、肝臟、脾、中腎、脂肪、肌肉、性腺及鰓等組織中的表達量。試驗結(jié)果如下:
   1.獲得了翹嘴鲌H-FABP基因部分CDS區(qū),并采用RACE技術(shù)克隆得到該基因的3’端和5’端未知區(qū)域,序列拼接后得到778bp的cDNA序列,其中包括編碼133個氨基酸和一個終止密碼子的完全CDS區(qū)序列(402bp),完整的3'UTR(242bp)區(qū)和5'UTR區(qū)(1

4、34bp)。
   2.通過Blast比對顯示翹嘴鲌H-FABP基因CDS區(qū)與鯉魚(Cyprinus carpio)、齊口裂腹魚(Schizothorax prenanti)的同源性達91%; H-FABP基因氨基酸同源性比對顯示與虹鱒的同源性為76%;與斑馬魚的同源性為85%,翹嘴鲌比斑馬魚在462位多兩個氨基酸,分別為谷氨酰胺(Q)和半胱氨酸(C)。
   3.得到翹嘴鲌LPL基因的—部分CDS區(qū),使用普通PCR分段

5、克隆剩余序列并采用RACE法獲得該基因的5,端和3,端未知區(qū)域,進行序列拼接,獲得由編碼502個氨基酸和—個起始密碼子的完全CDS區(qū)序列(1524bp)以及5'UTR(159bp)區(qū)和部分的3'UTR區(qū)(423bp)組成的共1947bp的基因組序列,Genbank登錄號為KC166231。
   4.核苷酸同源性比對顯示翹嘴鲌LPL基因CDS區(qū)與草魚(Ctenopharyngodon)的CDS區(qū)核苷酸同源性達到98%;草魚(Ct

6、enopharyngodon),鰱(Hypophthalmichthys molitrix),鳙(Aristichthys nobilis)的同源性達到97%以上;與鯉(Cyprinus carpio),斑馬魚(Danio rerio),鯽(Carassius auratus)等鯉科魚類的同源性為90%。
   5.對翹嘴鲌7個組織(鰓、心臟、腸、肝臟、肌肉、腎臟、脾臟)進行H-FABP和LPL基因表達分析。Real-time

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