1、暨南大學(xué)碩士學(xué)位論文暨南大學(xué)碩士學(xué)位論文類波氏真眼點藻二酰甘油?；D(zhuǎn)移酶（類波氏真眼點藻二酰甘油酰基轉(zhuǎn)移酶（DGAT）基因的克隆與功能）基因的克隆與功能分析分析CloningfunctionalanalysisofdiacylglycerolacyltransferasegenesinEustigmatoscf.polyphem作者姓名：王元麗王元麗指導(dǎo)教師姓名李愛芬李愛芬張成武張成武及學(xué)位、職稱：博士博士教授教授學(xué)科、專業(yè)名稱：水生生

2、物學(xué)水生生物學(xué)論文提交日期：2014年5月論文答辯日期：2014年6月答辯委員會主席：論文評閱人：學(xué)位授予單位和日期：暨南大學(xué)碩士學(xué)位論文類波氏真眼點藻二酰甘油酰基轉(zhuǎn)移酶（DGAT）基因的克隆與功能分析I摘要摘要類波氏真眼點藻（Eustigmatoscf.polyphem）屬于異鞭藻門（Heterokontophyta）真眼點藻綱（Eustigmatophyceae），是一種土壤黃綠色單細胞微藻。前期研究證實，該藻能合成多不飽和脂肪酸、

3、β胡蘿卜素和金藻昆布糖等高附加值生物活性物質(zhì)，特別是在氮限制培養(yǎng)后期能大量積累儲藏性油脂，是一株具有生物產(chǎn)品和生物燃料開發(fā)潛能的微藻。本文以類波氏真眼點藻（E.cf.polyphem）為研究材料，克隆藻細胞TAG合成途徑中二酰甘油?；D(zhuǎn)移酶（Diacylglycerolacyltransferase，DGAT）基因的cDNA全長序列，通過外源表達確定基因的具體功能，探討類波氏真眼點藻（E.cf.polyphem）在氮限制培養(yǎng)時TAG積累

4、過程中DGAT的轉(zhuǎn)錄水平表達情況，了解類波氏真眼點藻（E.cf.polyphem）中TAG合成代謝的分子機理與調(diào)控機制，為微藻生物能源的開發(fā)提供一定的理論依據(jù)。研究結(jié)果如下：（1）利用RACE技術(shù)擴增得到類波氏真眼點藻（E.cf.polyphem）二酰甘油酰基轉(zhuǎn)移酶基因EcfpDGATb的cDNA全長序列2347bp，同時分別得到EcfpDGATa和EcfpDGATc的3’cDNA序列309bp和480bp。（2）DNA序列分析發(fā)現(xiàn)Ec

5、fpDGATb全長cDNA含有23bp5’和338bp3’非翻譯區(qū)（UntranslatedRegions，UTR）序列，開放閱讀框（OpenReadingFrame，F(xiàn)）1986bp，編碼661個氨基酸；該蛋白質(zhì)N端具有43個氨基酸長度的預(yù)測信號肽和9個預(yù)測跨膜區(qū)，結(jié)構(gòu)域中包含6個II型DGAT的保守基序，說明EcfpDGATb可能屬于編碼II型DGAT的基因家族成員。（3）EcfpDGATb的異源表達證實其能使TAG合成缺陷酵母菌株

6、恢復(fù)部分的油滴積累能力，并偏好于利用16C不飽和與18C脂肪酸合成TAG，說明EcfpDGATb參與TAG的生物合成過程。（4）EcfpDGATb的mRNA相對表達量在兩種硝酸鈉濃度培養(yǎng)條件下都呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢，在高氮組（18mmolLNaNO3）中培養(yǎng)36h時達到最高相對表達量，低氮組（6mmolLNaNO3）在96h達到最高，表明EcfpDGATbmRNA水平的表達對氮限制有一定的響應(yīng)。關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞：類波氏真眼點藻；二酰甘油酰