1、三酰甘油(TAG)是絕大多數(shù)植物中最重要的油脂貯藏形式，二酰甘油?；D(zhuǎn)移酶(Diacylgycerol acyltransferase，DGAT)是三酰甘油合成的限速酶，它的主要作用是催化二酰甘油加上脂肪酸?；扇８视?。目前在植物中發(fā)現(xiàn)了4類DGAT:膜結(jié)合蛋白DGAT1，DGAT2，WS/DGAT以及可溶性的DGAT。DGAT在油脂合成、種子發(fā)育與成熟、種子萌發(fā)和幼苗生長、植株衰老與逆境脅迫響應(yīng)等過程中有重要作用。
　　

2、本文通過與擬南芥DGAT1，DGAT2全長氨基酸序列分別進(jìn)行同源性比較，從大豆中找到了2個(gè)與AtDGAT1，3個(gè)與AtDGAT2同源性較高的基因，并進(jìn)行克隆。分別命名為GmDGAT1-1，GmDGAT1-2;3個(gè)DGAT2，命名為GmDGAT2-1，GmDGAT2-2與GmDGAT2-3。它們分別編碼498，504，337，350與317個(gè)氨基酸。由進(jìn)化樹結(jié)果得知，GmDGAT1-1，GmDGAT1-2屬于DGAT1蛋白家族，與蓖麻，油

3、棕DGAT1的親緣關(guān)系最近。GmDGAT2-1，GmDGAT2-2，GmDGAT2-3屬于DGAT2蛋白家族，與擬南芥AtDGAT2，蓖麻RcDGAT2，油棕VfDGAT2均具有較高的同源性。利用TMHMM2.0軟件分析，發(fā)現(xiàn)GmDGAT1-1，GmDGAT1-2蛋白具有9個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)，GmDGAT2-1，GmDGAT2-2具有1個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)，GmDGAT2-3蛋白則具有3個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)。
　　 采用綠色熒光蛋白與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)標(biāo)記蛋白mChe

4、rry-HDEL進(jìn)行共定位，結(jié)果發(fā)現(xiàn)GmDGATs定位在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上，但在細(xì)胞核中也有一定的分布。
　　 利用釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)四缺突變體H1246(dga1，lro1，are1，are2)菌株進(jìn)行了這5個(gè)GmDGATs活性的測定，其中GmDGAT1-1，GmDGAT1-2，GmDGAT2-1和GmDGAT2-2均有DGAT活性。
　　 為進(jìn)一步研究GmDGATs的生理功能，采用熒光

5、實(shí)時(shí)定量PCR(Real-Time PCR)分析GmDGATs基因在大豆各組織中的表達(dá)情況，以及在鹽逆境脅迫處理下GmDGATs的應(yīng)答模式。GmDGAT1-1在未成熟種子中的表達(dá)量較高，GmDGAT1-2在各組織中的表達(dá)水平相當(dāng)。GmDGAT2-1在莖，葉中的表達(dá)水平相當(dāng)，在花中略高，但在種子中的表達(dá)量很低，而GmDGAT2-2的表達(dá)模式與之相反，在莖、葉、花中的表達(dá)量均較低，但在成熟種子中大量表達(dá)。GmDGAT2-3則在老葉中特異性表

6、達(dá)。250 mM NaCl處理后，葉片中GmDGAT1-1，GmDGAT2-2，GmDGAT2-3基因的表達(dá)量均發(fā)生上調(diào)。相比于這3個(gè)基因而言，在鹽處理后GmDGAT1-2與GmDGAT2-1，在根與葉中的表達(dá)量均發(fā)生略微的波動，但在6h后基本恢復(fù)原有的水平。
　　 我們鑒定了擬南芥突變體dgat1，dgat2，并構(gòu)建了過表達(dá)載體Super-1300-GmDGATs。分別得到了Super-1300轉(zhuǎn)基因(對照組)擬南芥3株，Su