1、研究背景：
　　 結節(jié)性硬化癥是一種常染色體顯性遺傳病，主要特征是在多個組織器官中出現良性腫瘤，比如腦部、心臟、腎臟等。該疾病常見臨床表現為面部血管纖維瘤、癲癇發(fā)作、智力低下等，嚴重影響患者的生活質量，總結其臨床表現與基因突變之間的關系，盡早對該疾病進行診斷治療，改善預后，甚至行產前診斷、提前干預，降低發(fā)病率及患病后的臨床癥狀。
　　 目的：
　　 現總結我院門診及住院11個家系中11名結節(jié)性硬化癥患兒的臨床表現

2、及其影像學改變，通過基因測序研究分析其基因突變類型，總結臨床表現與基因突變之間是否存在一定的關系，推測其相關性。
　　 方法：
　　 在征得家屬知情同意的情況下，該實驗收集了11個結節(jié)性硬化癥患者及其父母的臨床資料、頭顱影像學檢查及外周血樣，同時收集了10名正常兒童的外周血樣，以排除基因多態(tài)性，利用基因組DNA提取試劑盒提取外周血基因組DNA，根據人類基因組數據庫中查找的TSC1基因、TSC2基因，分別設計引物，采用聚合

3、酶鏈反應(PolymeraseChainReactiong，PCR)技術進行體外擴增，應用PCR產物回收試劑盒進行PCR產物回收、純化，請上海生物公司采用DNA直接測序的方法對TSC1、TSC2基因的外顯子及側翼序列測序，對其測序結果與GenBank中的序列對比分析，查找基因突變位點及其類型，對發(fā)現突變的采用TA克隆技術進一步驗證，判斷其可靠性。
　　 結果：
　　 1.PCR擴增片段與預計擴增片段長度一致，無非特異擴增

4、片段，可進行純化和測序;
　　 2.家系1中先證者TSC1基因第14外顯子發(fā)生無義突變(37841T＞A)，使得該外顯子編碼功能終止，TSC2基因第32外顯子發(fā)生雜合同義突變(36536C＞T)，先證者父母相應外顯子未見異常;
　　 3.家系2中先證者TSC2基因第29外顯子發(fā)現基因雜合突變(32254C＞T)，出現丙氨酸被蘇氨酸替代，先證者父母相應外顯子未見異常;
　　 4.家系5中先證者TSC1基因第15外顯

5、子發(fā)現同義突變(38782T＞C)，其父母相應外顯子未見異常;
　　 5.家系6中先證者TSC1基因第14外顯子發(fā)現雜合突變(37841T＞A)，使得編碼功能終止，其父母相應外顯子未見異常;
　　 6.家系7中先證者TSC1基因第18外顯子發(fā)現雜合突變(43834G＞A)，出現丙氨酸被色氨酸替代，其父母相應外顯子均未發(fā)現異常;
　　 7.余6家系先證者及其父母未發(fā)現TSC1、TSC2基因突變。
　　 結論

6、：
　　 1.11個家系中的先證者臨床表現及影像學異常符合結節(jié)性硬化癥的診斷標準，診斷明確，可進行積極治療，改善癥狀;
　　 2.家系1、2、6、7中發(fā)現的突變?yōu)橄茸C者發(fā)病的分子遺傳學基礎，考慮均為散發(fā)病例，可進行產前診斷及遺傳咨詢，有利于基因診斷的實施;
　　 3.家系5中發(fā)現同義突變的位點，認為不引起表型異常，尚不確定發(fā)病原因，與國外報道一致;
　　 4.余6個家系先證者未發(fā)現TSC1基因、TSC2基