1、肝豆?fàn)詈俗冃?Hepatolenticular degeneration，HLD)是一種難治性的常染色體隱性遺傳病，該病伴隨典型的銅離子代謝障礙。
　　通過(guò)探討，對(duì)研究肝豆?fàn)詈俗冃缘陌l(fā)病機(jī)制、疾病進(jìn)展、臨床治療以及預(yù)后轉(zhuǎn)歸有著及其重要的參考意義。近年來(lái)，關(guān)于肝豆?fàn)詈俗冃曰蛲蛔兒团R床表型關(guān)系的研究國(guó)內(nèi)外學(xué)者已進(jìn)行較多研究，但因肝豆?fàn)詈俗冃曰颊呋蛐投鄻樱R床表現(xiàn)復(fù)雜多變，并且不同地域不同種族其臨床表現(xiàn)和基因突變類型均存在較大差異，

2、因此目前尚無(wú)統(tǒng)一認(rèn)識(shí)。
　　目前肝豆?fàn)詈俗冃缘闹委熑砸运幬镏委煘橹?，青霉胺作為銅離子螯合劑，具有療效肯定、藥源充足、廉價(jià)、使用方便等優(yōu)點(diǎn)，因此是我國(guó)目前治療肝豆?fàn)詈俗冃缘闹饕幬镏?。根?jù)基因突變的研究結(jié)果，觀察不同基因突變類型患者使用青霉胺治療的效果，可以為肝豆?fàn)詈俗冃詡€(gè)體化治療奠定基礎(chǔ)。
　　目的：
　　1.根據(jù)肝豆?fàn)詈俗冃曰颊叩呐R床特點(diǎn)，按照臨床分型進(jìn)行回顧性分析，提高對(duì)肝豆?fàn)詈俗冃缘脑\斷意識(shí)，發(fā)現(xiàn)疾病進(jìn)展的規(guī)律

3、，對(duì)不同臨床癥狀的肝豆?fàn)詈俗冃曰颊弑M早明確診斷。
　　2.發(fā)現(xiàn)我國(guó)肝豆?fàn)詈俗冃曰颊吒哳l突變位點(diǎn)和新的基因突變位點(diǎn)，為建立有效地基因篩查及早期診斷提供參考依據(jù)。
　　3.研究我國(guó)肝豆?fàn)詈俗冃曰颊咧饕蛲蛔兾稽c(diǎn)的基因型與臨床表型的相關(guān)性，探討肝豆?fàn)詈俗冃缘陌l(fā)病機(jī)制，為肝豆?fàn)詈俗冃缘念A(yù)防、診斷、治療提供參。
　　4.探討肝豆?fàn)詈俗冃圆煌蛲蛔冾愋蛯?duì)應(yīng)用青霉胺治療的差別，分析臨床治療效果是否與基因突變類型有相關(guān)性，為肝豆?fàn)?/p>

4、核變性個(gè)體化治療提供指導(dǎo)。
　　方法：
　　本課題共包括四部分內(nèi)容:
　　第一章：肝豆?fàn)詈俗冃?13例流行病學(xué)研究
　　收集我院確診為肝豆?fàn)詈俗冃曰颊叩幕九R床資料，并收集整理統(tǒng)計(jì)相關(guān)檢驗(yàn)、檢查結(jié)果。根據(jù)臨床表現(xiàn)將肝豆?fàn)詈俗冃赃M(jìn)行臨床分型，將肝豆?fàn)詈俗冃苑譃楦涡?、腦型、其它類型、混合型。按照臨床分型對(duì)該病的首發(fā)癥狀、性別、血清銅、血清銅藍(lán)蛋白、24h尿銅、血谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alanIne amInotransfera

5、se，ALT)、透明質(zhì)酸(hyaluronic acid，HA)、Ⅲ型前膠原(precollagen typeⅢ，PCⅢ)、層黏蛋白(laminin，LN)、Ⅳ型膠原(collagenⅣ，CⅣ)的變化水平進(jìn)行探討。
　　第二章：WD基因突變位點(diǎn)的檢測(cè)與分析
　　收集我院2013年5月-2015年5月神經(jīng)內(nèi)科就診治療的患者52例，均確診為肝豆?fàn)詈俗冃?，選取50例無(wú)親緣關(guān)系的健康個(gè)體作為對(duì)照者，經(jīng)檢驗(yàn)24小時(shí)尿銅量、肝功能、血清

6、銅藍(lán)蛋白濃度、K-F環(huán)檢查、腹部彩超等無(wú)異常，臨床排除肝豆?fàn)詈俗冃砸约捌渌卮蠹膊?。提取基因組DNA并進(jìn)行P CR擴(kuò)增，將PCR產(chǎn)物經(jīng)Qiaquick Spin柱（德國(guó)Qiagen公司）純化后，進(jìn)行雙向測(cè)序，對(duì)ATP7B基因的21個(gè)外顯子及其啟動(dòng)子序列進(jìn)行檢查，查找所檢樣品中ATP7B基因中所存在的多態(tài)性位點(diǎn)。
　　第三章：肝豆?fàn)詈俗冃曰颊呋蛐秃团R床表型關(guān)系的研究
　　選取基因測(cè)序的52例WD患者為研究對(duì)象，收集上述患者的

7、臨床資料，以該研究中突變頻率較高的第8外顯子Arg778Leu突變、第13號(hào)外顯子上Pro992Leu突變及突變類型作為基因型，將臨床分型、性別、年齡、首發(fā)癥狀、K-F環(huán)、血清銅和銅藍(lán)蛋白、24小時(shí)尿銅、ALT、肝纖維化血清學(xué)結(jié)果作為臨床表型進(jìn)行比較。探討中國(guó)人WD患者高頻基因突變位點(diǎn)的基因型與臨床表型的相關(guān)性。
　　第四章：肝豆?fàn)詈俗冃圆煌蛲蛔冾愋颓嗝拱分委煼治?br>　　入組病例包括40例首診的肝豆?fàn)詈俗冃曰颊撸瑢⒒颊叻譃?/p>

8、Arg778Leu突變組和非Arg778Leu突變組，均使用青霉胺進(jìn)行驅(qū)銅治療，定期于治療后1、3、6、12月檢測(cè):血清銅、血清銅藍(lán)蛋白、24小時(shí)尿銅、ALT、HA、PCⅢ、LN和Ⅳ-C，探討不同基因突變類型的治療效果。
　　結(jié)果：
　　第一章：肝豆?fàn)詈俗冃?13例流行病學(xué)研究
　　1.入組病例包括肝型245例(47.8％)，腦型180例(35.1％)，其他類型35例(6.8％)，混合型53例(10.3％)。以肝癥狀為

9、首發(fā)癥狀者為271例(52.8％)，以神經(jīng)系統(tǒng)首發(fā)癥狀為201例(39.2％)，以其他癥狀為首發(fā)癥狀者為41例(8％)。
　　2.該研究發(fā)現(xiàn)，肝型、腦型與其他類型相比血清銅藍(lán)蛋白水平存在顯著差異;肝型、腦型、其他類型與混合型相比，血清銅藍(lán)蛋白的改變具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義?；旌闲脱邈~藍(lán)蛋白降低更為明顯。
　　3.和腦型與混合型相比，肝型患者中血清ALT平均值顯著升高（P＜0.05）。
　　4.HA、PCⅢ、LN、CⅣ在各臨床分

10、型間均在顯著差異。其他類型的血清HA值與肝型、腦型和混合型存在顯著差異;血清PCⅢ檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，其他類型與肝型、腦型和混合型相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。血清LN檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，腦型、其他類型、混合型和肝型相比，腦型與混合型相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;血清CⅣ檢測(cè)，肝型、腦型與混合型相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　5.肝纖維化或肝硬化各臨床分型相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。肝型患者中82％的患者超聲檢查顯示肝纖維化或肝硬化，腦型、其他類型和混合型肝纖維化或肝

11、硬化所占比例分別為:66％、43％、68％。因此肝型患者出現(xiàn)肝纖維化或肝硬化的比例遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其他類型的肝豆?fàn)詈俗冃曰颊摺?br>　　第二章：WD基因突變位點(diǎn)的檢測(cè)與分析
　　1.發(fā)現(xiàn)62個(gè)ATP7B變異位點(diǎn)，其中23個(gè)為已知的致病突變位點(diǎn)，6個(gè)為首次發(fā)現(xiàn)的錯(cuò)義、插入和缺失突變。
　　2.第8、11、12和13外顯子為高頻率突變熱點(diǎn)，并且堿基替換較其他突變類型更為常見(jiàn)，提示我們?cè)赪D患者人群中堿基替換是主要的突變類型。其中，位于

12、第8外顯子2333G＞T檢出頻率最高(即Arg778Leu)，達(dá)到47％。13號(hào)外顯子2975C→T位點(diǎn)突變頻率達(dá)22％。
　　第三章：肝豆?fàn)詈俗冃曰颊呋蛐秃团R床表型關(guān)系的研究
　　1.52例肝豆?fàn)詈俗冃曰颊咧蠥rg778Leu突變患者與非Arg778Leu突變患者之間臨床分型、性別、年齡、首發(fā)癥狀、K-F環(huán)、血清銅和銅藍(lán)蛋白、ALT、肝纖維化指標(biāo)的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　2.52例肝豆?fàn)詈俗冃曰颊咧?/p>

13、Pro992Leu突變與非Pro992Leu突變患者之間臨床分型、性別、年齡、首發(fā)癥狀、K-F環(huán)、24小時(shí)尿銅、血清銅和銅藍(lán)蛋白、肝纖維化指標(biāo)的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05）。
　　3.52例肝豆?fàn)詈俗冃曰颊咧蠥rg778Leu突變24小時(shí)尿銅水平低于非Arg778Leu突變患者(P＜0.05)。
　　4.52例肝豆?fàn)詈俗冃曰颊咧蠵ro992Leu突變患者其ALT水平低于非Pro992Leu突變組（P＜0.05）。

14、>　　第四章：肝豆?fàn)詈俗冃圆煌蛲蛔冾愋颓嗝拱分委煼治?br>　　1.青霉胺治療12個(gè)月后，Arg778Leu攜帶者24小時(shí)尿銅下降水平的更為明顯（P＜0.05）。
　　2.青霉胺治療12個(gè)月后，Arg778Leu突變組的Ⅳ-C的下降更為明顯(P＜0.05)。
　　3.青霉胺治療后Arg778Leu與血清銅、血清銅藍(lán)蛋白、ALT、HA、PCⅢ和LN均未見(jiàn)明顯相關(guān)性。
　　結(jié)論：
　　1.各臨床分型相比ALT、H

15、A、PCⅢ、LN、CⅣ的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，肝纖維化或肝硬化與臨床分型顯著相關(guān)。
　　2.發(fā)現(xiàn)有62個(gè)ATP7B變異位點(diǎn)，其中23個(gè)為已知的致病突變位點(diǎn)，6個(gè)為首次發(fā)現(xiàn)的錯(cuò)義、插入和缺失突變。
　　3.第8、12和13外顯子為我國(guó)人群高頻率突變位點(diǎn)。
　　4.52例Arg778Leu突變24小時(shí)尿銅水平低于非Arg778Leu突變患者; Pro992Leu突變患者其ALT水平低于非Pro992Leu突變組。
　　

16、5.52例Arg778Leu突變患者與非Arg778Leu突變患者之間臨床分型、性別、年齡、首發(fā)癥狀、K-F環(huán)、血清銅和銅藍(lán)蛋白、ALT、肝纖維化指標(biāo)之間無(wú)顯著性差異。
　　6.52例Pro992Leu突變與非Pro992Leu突變患者之間臨床分型、性別、年齡、首發(fā)癥狀、K-F環(huán)、24小時(shí)尿銅、血清銅和銅藍(lán)蛋白、肝纖維化指標(biāo)之間無(wú)顯著性差異。
　　7.青霉胺治療后12個(gè)月Arg778Leu突變組較非Arg778Leu突變組2