1、過氧化物還原酶家族(Peroxiredoxins，Prxs)是抗氧化酶家族成員，廣泛存在于各種生物體內(nèi)，是一類能降解烷基氫過氧化物和過氧化氫的一類無亞鐵血紅素過氧化物還原酶。本研究從松材線蟲體表的熒光假單胞菌GcM5-1A克隆出一個(gè)639bp的完整基因，編碼一個(gè)由213個(gè)氨基酸組成的蛋白質(zhì)。氨基酸序列同源性比對(duì)發(fā)現(xiàn)，目的蛋白的氨基酸序列分別與Pseudomonas fluorescens Q2-87的硫醇特異性抗氧化蛋白LsfA有99％

2、的同源性，與Pseudomonas sp.GM17的過氧化物還原酶有97％的同源性，與Pseudomonas fluorescens Pf0-1的1-半胱氨酸過氧化物還原酶有97％的同源性。將完整的開放閱讀框克隆到表達(dá)載體pET-15b，構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pET-15b-1-Cys-Prx，并轉(zhuǎn)化Escherichia coli BL21(DE3)，擴(kuò)大培養(yǎng)經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)，利用鎳離子瓊脂糖凝膠親和層析純化得到27 kDa的重組蛋白。非

3、變性SDS-PAGE分析發(fā)現(xiàn)重組蛋白有部分是以二聚體形式存在的。通過活性分析發(fā)現(xiàn)重組蛋白同時(shí)具有過氧化物還原酶和硫氧還蛋白活性。研究發(fā)現(xiàn)含有重組表達(dá)質(zhì)粒的工程菌明顯增強(qiáng)了對(duì)過氧化氫壓力的耐受性。
　　另外，本研究采用RT-PCR的方法，從黑松愈傷組織中獲得過氧化物酶cDNA，其開放閱讀框全長(zhǎng)981 bp，編碼326個(gè)氨基酸殘基。將該開放閱讀框克隆到表達(dá)載體pET-15，構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pET-15b-POD，轉(zhuǎn)化E.coli BL