1、Vsr1是第一個在金魚中發(fā)現(xiàn)的編碼含有同源異型框(homeodomain)和CVC結(jié)構(gòu)域蛋白的基因，并已經(jīng)證明該基因在視網(wǎng)膜視錐雙極細(xì)胞的分化和正常功能的維持中具有重要作用，但該基因也在胚胎發(fā)育的不同階段在胚胎的不同區(qū)域和組織中表達(dá)。為進(jìn)一步研究該基因在胚胎發(fā)育中的作用，以及在不同發(fā)育階段和組織中特異性表達(dá)的調(diào)節(jié)機(jī)制，本研究運(yùn)用PCR、亞克隆、RT-PCR等分子生物學(xué)技術(shù)，對金魚VSXl基因進(jìn)行了研究。主要內(nèi)容、結(jié)果和結(jié)論如下：

2、 (1)根據(jù)金魚vsxl cDNA序列設(shè)計特異性引物，PCR擴(kuò)增了vsxl的基因全序列，與vsxl mRNA序列比對后確定金魚vsxl由5個外顯子和4個內(nèi)含子組成，與斑馬魚、人、小鼠的vsxl基因結(jié)構(gòu)相同。 (2)用RT-PCR方法分析了金魚成體vsxl的組織表達(dá)，結(jié)果顯示vsxl除了在成體視網(wǎng)膜中表達(dá)以外，還在肝臟、腎臟、脾臟和尾鰭中低量表達(dá)，說明vsxl在除眼睛以外的其它器官和組織中還有更多的功能。 (3)vsxl有

3、兩種不同的mRNA序列，兩者相差12個堿基，這兩種不同的mRNA來自vsxl mRNA前體第四外顯子的5’選擇性剪接。5’選擇性剪接導(dǎo)致vsxl保守的CVC結(jié)構(gòu)域4個氨基酸的插入或缺失。 (4)vsxl兩種不同的mRNA具有組織特異性。金魚成體視網(wǎng)膜中有vsxl兩種不同mRNA的存在，而腎臟、脾臟和尾鰭中只存在一種。 (5)vsxl兩種不同的mRNA具有發(fā)育時間特異性。未受精卵中只有一種vsxlmRNA的存在，在囊胚中期

4、及其以后的發(fā)育時期有兩種vsxl mRNA的存在。 (6)金魚vsxl基因的第一內(nèi)含子存在兩種明顯不同的類型，其它內(nèi)含子無明顯差異。兩種不同類型第一內(nèi)含子的序列相似性僅為79.4％，在57個位點存在堿基多態(tài)性。在序列長度上相差39個堿基，這39個堿基中包括了真核生物增強(qiáng)子的核心序列。用軟件預(yù)測發(fā)現(xiàn)不同類型的第一內(nèi)含子中可以與不同的轉(zhuǎn)錄因子相結(jié)合，提示第一內(nèi)含子可能與vsxl的表達(dá)調(diào)控相關(guān)。同時，第一內(nèi)含子序列的明顯差異也為分析v