1、目的:谷氨酰胺是營(yíng)養(yǎng)和代謝領(lǐng)域最為關(guān)注的研究課題之一,但是,目前在靜脈營(yíng)養(yǎng)液中不補(bǔ)充谷氨酰胺(Gln),正在研究中的Gln添加劑也不穩(wěn)定。本文進(jìn)行Gln相關(guān)研究以期待對(duì)危重病進(jìn)行更好的營(yíng)養(yǎng)支持。而由于技術(shù)方面的原因,進(jìn)行了種種比較后,我們準(zhǔn)備利用MS(methioninesulfoximine),人為造成新生幼鼠體內(nèi)Gln缺乏來(lái)模擬新生兒出生后低Gln的狀態(tài)來(lái)進(jìn)行腸道改變的研究,在母鼠喂養(yǎng)條件下造成新生大鼠谷氨酰胺缺乏后,觀察新生鼠腸道

2、改變。
　　 方法:購(gòu)買清潔級(jí)SD孕鼠10只,放置在復(fù)旦大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心飼養(yǎng)。孕鼠分娩后形成10窩新生幼鼠,每2窩為一組,并按照試驗(yàn)要求分組研究,新生小鼠出生后進(jìn)行標(biāo)記,每天進(jìn)行稱重。MS粉劑(methioninesulfoximine)用無(wú)菌注射用水配成25g/L母液,保存在4℃冷藏室。注射MS量100mg/kgd。分組情況:第1組母鼠分娩后第3天起不用MS×6天+新生幼鼠生后第3天起不用MS×6天;第2組母鼠分娩后第3

3、天起腹腔注射MS×6天+新生幼鼠生后不用MS×6天;第3組母鼠分娩后第1天起腹腔注射MS×6天+新生幼鼠生后不用MS×6天;第4組母鼠分娩后第3天起腹腔注射MS×6天+新生幼鼠生后第3天起腹腔注射MS×6天;第5組母鼠分娩后不用MS×6天+新生幼鼠生后3天起腹腔注射MS×6天;
　　 實(shí)驗(yàn)進(jìn)行到第7天,在稱量后處死新生幼鼠取血,離心取上清液,使用高效液相色譜法對(duì)血漿谷氨酰胺濃度測(cè)定?？v向剖開回腸末端腸道組織,刮取粘膜稱重(約50

4、mg-100mg),在冰壺上勻漿,每50mg的粘膜組織加入PBS液1ml混勻,17,500g×15min,4℃離心,取上清,-70℃保存待測(cè)。根據(jù)ELISA試劑盒操作說(shuō)明書進(jìn)行各組腸道粘膜的細(xì)胞因子表達(dá)水平測(cè)定IL-1、TNF-α、MCP-1。腸道黏膜組織切片,經(jīng)HE染色在光鏡下觀察絨毛的長(zhǎng)度和寬度的變化。
　　 結(jié)果經(jīng)過(guò)對(duì)5組新生幼鼠的不同處理方式,造成了5組之間血漿Gln濃度的顯著差異,通過(guò)比較還可以發(fā)現(xiàn)這種Gln濃度的差異

5、與腸道形態(tài)學(xué)的變化,與炎癥有關(guān)的細(xì)胞因子的變化是存在一定聯(lián)系的。第1組作為正常對(duì)照組與其余4組相比,出現(xiàn)明顯Gln濃度最高,腸道絨毛高度最長(zhǎng),腸道絨毛的排列最為整齊不雜亂,腸道黏膜組織勻漿液細(xì)胞因子檢測(cè)中MCP-1,IL-1β水平相對(duì)較高。相反,第4組由于母鼠和新生幼鼠同時(shí)進(jìn)行MS腹腔注射,相對(duì)于新生幼鼠而言內(nèi)源性和外源性來(lái)源的Gln同時(shí)受到抑制,結(jié)果血漿Gln濃度最低,僅為正常對(duì)照組的1/9水平,形態(tài)學(xué)也發(fā)生明顯改變,腸道絨毛最短,排

6、列最紊亂,甚至有脫落,因此腸道的完整性也最差,從腸道黏膜組織勻漿液細(xì)胞因子的檢測(cè)中可以看到MCP-1和IL-1β水平最低,也就暗示著在遭遇感染等炎癥刺激時(shí),由于這些細(xì)胞因子存在紊亂,因而在炎癥刺激時(shí)容易出現(xiàn)免疫紊亂而造成抵抗病原微生物能力降低。另外3組介于1和4組之間,不同程度的表現(xiàn)出血漿Gln濃度降低,腸道絨毛高度變短、排列不齊,組織勻漿液細(xì)胞因子MCP-1和IL-1β的水平降低,所以,抵抗感染的能力也將不同程度的降低。雖然第4組的死