谷氨酰胺對膿毒癥大鼠血清毒性作用的影響及其機制研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:研究膿毒癥大鼠血清對巨噬細胞、內皮細胞功能的影響,以及加入谷氨酰胺(Gln)對血漿該作用的影響,探討Gln在膿毒癥中的保護作用機制。 方法: 第一部分:SD大鼠18只,隨機分為假手術組(Sham)、膿毒癥組(CLP)、Gln處理組(GLN)。CLP和GLN組采用盲腸結扎穿孔術(CLP)制備大鼠膿毒癥模型,術后即刻從尾靜脈注射Gln 0.75g/kg(GLN組)或等量生理鹽水(CLP組)。6h后采血收集血清/血漿及肺

2、組織,并將血清與RAW264.7細胞孵育4h后收集上清液。鱟試劑法定量測定血漿內毒素濃度;比色法檢測血漿D-乳酸和Gln水平。酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定肺組織TNF-α水平及血清作用于RAW264.7細胞后上清液中TNF-α與IL-6的水平。 第二部分:在第一部分動物實驗的基礎上,將各組大鼠血清與HUVEC細胞孵育8h后分別進行CCK-8細胞計數(shù)、Hoechst33342/PI熒光染色實驗,以及0h、12h、24h的劃痕實

3、驗。 結果: 第一部分:CLP組血漿D-乳酸水平明顯高于GLN和Sham組,而GLN和Sham組無明顯差異;CLP組血漿中LPS濃度顯著高于Sham和GLN組,而GLN組LPS濃度又顯著高于Sham組;Sham、CLP和GLN三組間Gln含量均無明顯差別;CLP組肺組織中TNF-α濃度顯著高于Sham和GLN組,GLN組與Sham組之間無顯著差異。CLP組大鼠血清刺激RAW264.7細胞后TNF-α、IL-6釋放較之Sh

4、am組顯著升高,而加入GLN組大鼠血清后TNF-α、IL-6濃度較之CLP組明顯下降,GLN組與Sham組無明顯差異。 第二部分:CLP組HUVEC細胞的OD值顯著低于Sham組,而GLN組顯著高于CLP組,GLN組與Sham組之間無顯著差異;CLP組HUVEC細胞的壞死率顯著高于Sham組,而GLN組顯著低于CLP組。但GLN組也顯著高于Sham組;在0h各組細胞間的殘存距離無差別,在孵育12h和24h后CLP組細胞的殘存距離

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