1、目的:探討谷氨酰胺是否可以減少膿毒癥小鼠的氧化應(yīng)激損傷，在危重癥疾病氧化應(yīng)激狀態(tài)下發(fā)揮保護(hù)作用。
　　方法:
　　1.動(dòng)物分組與造模方法:
　　5周齡雄性昆明小鼠30只，利用隨機(jī)數(shù)字表，采取完全隨機(jī)方法將其平均分為三組，每組10只，分別設(shè)為對(duì)照組，（control，C組）、內(nèi)毒素組(LPS，L組)、谷氨酰胺組（Gln，G組）。
　　內(nèi)毒素組與谷氨酰胺組采用腹腔注射內(nèi)毒素的方法制造膿毒癥動(dòng)物模型，內(nèi)毒素的注射劑量為

2、5ml/kg。對(duì)照組腹腔注射等量生理鹽水。造模成功后，谷氨酰胺組即刻尾靜脈注射丙氨酰谷氨酰胺注射液，注射劑量為0.75g/kg。內(nèi)毒素組尾靜脈注射等量無(wú)菌生理鹽水作為陽(yáng)性對(duì)照，對(duì)照組尾靜脈注射等量生理鹽水作為陰性對(duì)照。6小時(shí)后終止實(shí)驗(yàn)，眼眶取血后采用頸椎脫臼法處死動(dòng)物，解剖分離動(dòng)物肝、腎組織，迅速液氮冷凍。動(dòng)物血低溫放置，待血清析出后離心，取血清，液氮冷凍待測(cè)。
　　2.氧化應(yīng)激指標(biāo)的測(cè)定方法:
　　每次測(cè)試樣品前先將樣品從

3、液氮中取出在4℃冰箱中解凍。取動(dòng)物組織塊在冰冷的生理鹽水中漂洗，除去血液，濾紙拭干，準(zhǔn)確稱重0.3g，放入勻漿管中，按重量(g)∶體積(ml)=1∶9的比例加入9倍體積的勻漿介質(zhì)（生理鹽水2.7ml）于勻漿管中，冰水浴條件下，用眼科小剪盡快剪碎組織塊。將玻璃勻漿管置于冰水浴條件下，手動(dòng)勻漿，30秒/次，間隔30秒，重復(fù)6～8次，制成10％的勻漿液。將制備好的10％勻漿液用普通離心機(jī)2500轉(zhuǎn)/分，離心15分鐘，取上清液進(jìn)行測(cè)定。部分10

4、％的勻漿液用生理鹽水按體積比1∶9稀釋成1％的組織勻漿待測(cè)。為達(dá)到實(shí)驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定性，制備好的勻漿液都在在制備當(dāng)天進(jìn)行測(cè)定。
　　取3組小鼠血清、肝、腎組織勻漿進(jìn)行氧化應(yīng)激指標(biāo)谷胱甘肽過(guò)氧化物酶GSH-Px(glutathion peroxidase)、超氧化酶歧化酶SOD(superoxide dismutase)、丙二醛MDA(malonaldehyde)的測(cè)量。具體的測(cè)量方法按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。
　　3.數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)方法:

5、
　　數(shù)據(jù)的收集與錄入使用Excel2003，數(shù)據(jù)的描述與分析使用SPSS16.0。首先對(duì)各組進(jìn)行正態(tài)性與方差齊性檢驗(yàn)，如果獨(dú)立樣本的數(shù)據(jù)服從正態(tài)性與方差齊性，采取參數(shù)檢驗(yàn)方法進(jìn)行假設(shè)檢驗(yàn)。兩獨(dú)立樣本的比較取用完全獨(dú)立樣本比較的t檢驗(yàn)，三個(gè)獨(dú)立樣本的比較采用完全獨(dú)立多樣本比較的單因素方差分析。進(jìn)一步的兩兩比較采用SNK-q法進(jìn)行。如果資料不服從正態(tài)性與方差齊性，則采用多個(gè)獨(dú)立樣本比較的Kruskal-Wallis H非參數(shù)檢驗(yàn)，進(jìn)

6、一步的兩兩比較采用秩轉(zhuǎn)換的方差分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，P＜0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1.谷氨酰胺組的小鼠血清、肝臟和腎臟中的GSH-Px、SOD水平均高于內(nèi)毒素組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2.谷氨酰胺組的小鼠血清、肝臟和腎臟中的MDA水平低于內(nèi)毒素組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論:膿毒癥造成氧化應(yīng)激與氧化損傷，使用谷氨酰胺可以提高抗氧化酶GSH-Px、SOD的水平，增強(qiáng)抗氧化能力。減